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目的: 正畸医师对患者进行矫治的主要手段是施用力。由正畸装置产生的力通过牙齿,传递到牙周组织,使牙周组织发生改建,从而达到牙齿移动的目的。牙周膜作为连接牙根与牙槽骨的致密结缔组织,是正畸力的直接效应组织,在牙周改建过程中具有重要作用。机械力作用下的牙齿移动分子机制极为复杂,包括牙周组织内的血液供应改变,细胞外基质结构和功能的改变,局部合成和释放多种生物分子包括神经递质、细胞因子、生长因子、集落促进因子等。研究力学信号是如何转化为化学信号,继而参与正畸牙周组织改建,是当前口腔正畸学的研究热点。 串珠素作为一类大分子量硫酸乙酰肝素糖蛋白(Heparan Sulfate Proteoglycan,HSPG),在多种细胞的胞外基质和细胞膜上均有表达。它能结合或者释放包括成纤维细胞生长因子(Fibroblast Growth Factor,FGF)、血管内皮细胞生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)等在内的多种细胞因子、生长因子以及其他一些功能分子,在细胞生长、增殖和分化等多种过程中发挥功能。有关牙周膜细胞在机械力作用下各类生长因子如FGF、VEGF等表达改变的研究,国内外已有一定进展。然而,有关串珠素与牙周组织改建之间联系的研究尚未见文献报道。本研究拟通过建立大鼠牙齿正畸移动模型和人牙周膜细胞应力加载模型,分别从体内与体外两个角度研究串珠素在正畸牙周组织改建中的表达及作用,从而为临床矫治提供实验依据。 方法: 1.建立大鼠牙齿移动实验模型,以上颌切牙为支抗,25g恒力牵拉一侧上颌第一磨牙近中移动。未加力组作为对照,加力1d,3d,7d,14d后,处死大鼠,常规固定、脱钙、石蜡包埋后制作第一磨牙以及牙周组织近远中向切片。免疫组化染色,显微镜下观察串珠素在牙周组织内的空间分布和表达变化。同时采用IPP软件对各组染色强度进行半定量分析。 2.酶消化法培养人牙周膜细胞,并通过抗波形蛋白和抗角形蛋白染色鉴定细胞来源。取3-5代性状稳定,生长旺盛的牙周膜细胞进行后续实验。采用Flexcell细胞应力加载仪对人牙周膜细胞施以12% elongation,1Hz的单轴张应力。加力时长分别为12h,24h,48h,不加力组作为对照。然后通过实时定量PCR和ELISA方法分别检测张应力下不同时间点串珠素基因和蛋白表达变化。 结果: 1.正常大鼠牙周膜内串珠素呈强阳性染色,分布均匀。随加力时间增长,张力侧和压力侧染色强度均有不同程度的降低,表达贯穿整个牙齿移动过程。张力侧从3d开始,牙周膜内串珠素表达强度较对照组显著降低,靠近牙槽骨侧的牙周膜成阳性表达,其他区域弱阳性表达。随后,串珠素表达强度进一步降低,14d组仅牙槽骨侧牙周膜存在散在弱阳性染色区域,而靠近牙根侧牙周膜内无明显阳性染色区域。在压力侧,1d组和3d组,牙周膜细胞间质内存在串珠素阳性染色,强度较对照组显著降低。随加力时间进展,串珠素表达强度进一步降低。14d时,仅牙槽骨侧牙周膜内存在弱阳性表达,其他部位内未见明显阳性染色。 2.经免疫组化染色鉴定,所培养的细胞抗波形蛋白阳性,抗角蛋白阴性,符合成纤维细胞样特征。正常人牙周膜细胞存在较高的串珠素mRNA和蛋白表达。张应力加载后,串珠素mRNA在加力的前12h内表达水平出现短暂升高(P=0.396),但无统计学意义。然后随加力时间增长,mRNA表达持续下降,48h后达到最低水平(P<0.05),至对照组的0.28±0.049;而细胞基质内的串珠素蛋白表达则随着加力时间一直下降,48h后从14.03±0.71 pg/ml(对照组)降到最低水平11.06±0.15 pg/ml,具有统计学差异(P<0.05)。 结论: 1.串珠素在大鼠正常牙周组织呈强阳性染色,分布均匀。牙齿移动过程中,串珠素表达减弱贯穿整个牙周改建过程,且表达水平与位置改变具有一定的时空规律性,提示串珠素参与了正畸牙移动过程中的牙周改建。 2.正常人牙周膜细胞内存在较高的串珠素基因与蛋白表达。张应力刺激下,人牙周膜细胞串珠素mRNA以及蛋白表达水平下降,且变化具有时间规律性,从细胞分子水平确定了串珠素与正畸牙移动时的牙周改建有关。