白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌细胞膜、细胞壁和液泡的作用及机制研究

来源 :安徽中医药大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:wistaria
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:探讨白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌细胞膜、细胞壁和液泡的作用及机制。方法:首先采用微量液基稀释法检测白头翁汤正丁醇提取物(Butyl alcohol extract of BaiTouWeng decoction,BAEB)对白念珠菌的MIC80和SMIC80。针对白念珠菌细胞膜,通过spot assay观察BAEB对白念珠菌细胞活性的影响;通过酶标仪检测白念珠菌细胞内甘油含量以反映白念珠菌细胞内渗透压的变化;qRT-PCR定量检测白念珠菌细胞内渗透压相关基因的表达;通过荧光显微镜观察BAEB对白念珠菌细胞膜通透性的影响;通过高效液相测定白念珠菌细胞膜中麦角甾醇的含量;qRT-PCR定量检测白念珠菌细胞膜麦角甾醇合成相关基因的表达。针对白念珠菌细胞壁,Spot assay检测BAEB、荧光白(Calcofluor white,CFW)、刚果红(Congo red,CR)对白念珠菌细胞活性的影响;流式细胞仪和酶标仪检测BAEB对白念珠菌细胞壁β-1,3-葡聚糖的影响;流式细胞仪检测BAEB对白念珠菌细胞壁几丁质的影响;qRT-PCR检测白念珠菌细胞壁β-1,3-葡聚糖合成相关基因及几丁质合成相关基因的表达;透射电镜观察白念珠菌细胞壁。针对白念珠菌液泡,通过荧光显微镜观察BAEB对白念珠菌液泡膜的影响;qRT-PCR定量检测BAEB对白念珠菌液泡合成相关基因表达的影响。结果:256、512、1024μg/mL BAEB干预下白念珠菌的菌落数逐渐减少,活性逐渐降低;512、1024μg/mL BAEB组白念珠菌胞内甘油含量分别为444.64±0.9nmol/mg、571.93±4.3 nmol/mg,和空白对照组相比甘油含量显著性增多(P<0.05),256、512、1024μg/mL BAEB组白念珠菌细胞内渗透压的相关基因HOG1分别下调了9.1倍、9.3倍、5.5倍;512、1024μg/mL BAEB组白念珠菌产生红色荧光的细胞显著增多;1024μg/mL BAEB干预后麦角甾醇峰面积为35.88495,与空白对照组对比有显著性差异(P<0.05);1024μg/mL BAEB干预组白念珠菌细胞膜麦角甾醇合成相关基因ERG1、ERG2、ERG3、ERG4、ERG5、ERG6、ERG10、ERG11、ERG13、ERG24、ERG25、ERG251、ERG26与UPC2分别下调了6.57、4.88、4.14、9.23、3.40、9.83、3.07、7.49、5.52、5.89、2.44、3.24、1.97、10.06倍。刚果红、荧光白和BAEB组分别与白念珠菌空白对照组相比,活性均降低;256、512、1024μg/mL BAEB组白念珠菌细胞壁β-1,3-葡聚糖与几丁质暴露逐渐增多(P<0.05);1024μg/mL BAEB干预组FKS1、CHS1、CHS2、CHS3、CHS8等β-1,3-葡聚糖与几丁质合成相关基因分别下调5.57、2.96、3.29、4.47、3.00倍;透射电镜观察BAEB干预后白念珠菌细胞壁的结构有破损且电子密度小,细胞壁溶解。通过酵母液泡膜染料MDY-64染色,随着BAEB浓度的增高白念珠菌液泡膜产生的绿色荧光显著减少,呈剂量依赖的特征,液泡膜破损;1024μg/mL BAEB干预组APM1、CLA4、PEP7、PEP12、PKH2、VPS15、VPS34、VPS41、YPT72等液泡合成相关基因分别下调4.410、4.534、4.070、2.184、4.506、11.435、11.316、3.192、2.372倍。结论:以上结果表明BAEB可能通过使细胞膜结构破损,细胞膜关键组分含量减少,进而破坏白念珠菌细胞膜的完整性从而抑制白念珠菌细胞的活性,同时可以抑制白念珠菌细胞膜麦角甾醇合成相关基因的表达,减少麦角甾醇的合成。BAEB可使白念珠菌细胞壁β-1,3-葡聚糖及几丁质暴露从而破坏细胞壁的结构。同时可通过抑制β-1,3-葡聚糖、几丁质生物合成相关基因的表达,进而破坏细胞壁的结构,影响白念珠菌细胞壁完整性。BAEB可损伤白念珠菌液泡膜及下调白念珠菌液泡合成相关基因。本研究为研发新型抗真菌药物及抗真菌机制的阐明提供实验依据。
其他文献
<正>古诗是中华民族的重要传承文化之一,同时也是小学语文的重要组成部分。在小学语文中,古诗大多是绝句和律诗。它们形式含蓄,短小精悍,语句凝炼,但又意境深远,寥寥几句,背
为了对分布式光伏电站接入点电压进行有效控制,给出了一种含分布式光伏电站接入的配电网三级电压控制系统设计方法。通过对分布式光伏电站特点的分析,从系统结构、控制模式、
发展战略性新兴产业是推动经济发展方式转变和产业转型升级的重要途径,技术创新是关键环节,而市场需求是其技术创新的重要驱动力。本文运用分位数回归模型,利用战略性新兴产
整理分析了饮马河中下游石头口门和四马架水文站的实测水文资料,根据绘制的各水文站历年汛前汛后实测大断面比较图,比较直观的反映了饮马河中下游河道演变的特性,并进一步分
<正> 1993年,以马兰拉面为代表的民族快餐业崛起,为尚在摸索中发展的中式快餐探寻了方向。本文从剖析马兰拉面的经营之道入手,着重探讨了中式快餐的发展之路。 一、马兰拉面
多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是青春期和育龄期女性的常见妇科内分泌疾病之一,会影响患者余生的健康。PCOS患者存在远期并发代谢紊乱、心血管疾病和子宫
目的:研究老年急性冠脉综合征患者外周血循环microRNA-92a的表达量及衰弱评分与冠状动脉狭窄程度Gensini评分的关系,探讨microRNA-92a联合衰弱评分对冠状动脉狭窄程度的评估作用。方法:入选2018年4月至2018年8月在广西壮族自治区人民医院心血管内科住院的老年急性冠脉综合征患者60例,对入组病人进行冠状动脉造影检查,依据结果行Gensini评分。根据患者既往史、现病史等情况计
本文首先对司法鉴定项目进行了简要介绍,然后重点从司法鉴定项目的业务特点、流程、风险及操作要点等方面进行阐述和分析,最后对司法鉴定项目风险的识别和防范及操作要点进行
伴随我国经济的不断发展,铁路建设也随之发展迅速,对铁路施工相关企业而言是一次难得的机遇,其生产规模也随之扩大,基于此,文章对铁路各项施工项目的成本管理进行了具体的分
计算机病毒一直是计算机安全的主要威胁,国际空间的病毒总数已达几万甚至更多。在Internet上传播的新型网络型病毒,更增加了这种威胁的程度,这样势必要对整个网络进行全面的