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研究背景胆管癌是起源于胆道上皮细胞的恶性肿瘤,约占肝胆系统恶性肿瘤的15%。由于断面影像学检查往往难以发现胆管的占位性病变,胆管癌组织细胞学在术前诊断中十分重要。但是特殊的解剖位置使得胆道标本获取困难,而且取得的标本量小,造成细胞学诊断率低下。因此,需要寻找更为灵敏、可靠的方法提高胆管癌的临床诊断率。肿瘤组织中广泛存在染色体非整倍体改变。通过荧光原位杂交(Fluorescencein situ hybridization,FISH)检测细胞染色体异常可以协助肿瘤诊断,但是在胆管癌中相应的应用报道很少。另一方面,Aurora激酶A(AURKA)是细胞有丝分裂过程中的重要调控蛋白,其表达水平增高可以造成染色体分离不均匀,细胞发生染色体非整倍体改变。现已证实AURKA在人类多种肿瘤中存在过表达,而且与肿瘤的生物学行为有关。但是目前对胆管癌中AURKA的表达情况尚缺乏了解。研究目的我们希望通过对胆道肿瘤细胞株、病理组织及临床胆道细胞刷标本的研究明确:1)胆管癌细胞染色体非整倍体改变的情况;2)应用荧光原位杂交技术是否能够提高临床胆管细胞学标本的肿瘤诊断率;3)AURKA在胆管癌中的表达水平;4)AURKA表达与胆管癌的生物学行为是否具有相关性。研究方法我们选择具有广泛肿瘤细胞学研究基础并获得FDA认证的UroVysion混合探针,分别1)对QBC939(胆管癌细胞株)、GBC-SD(胆囊癌细胞株)、CC-HEL-1(胎肝细胞株)进行原位杂交,比较胆道肿瘤细胞与正常细胞染色体杂交信号数目的情况;2)对胆管癌组织及炎性胆管组织进行原位杂交,比较二种组织中杂交信号数目的情况;3)对27例临床胆道细胞刷标本进行原位杂交,以病理或临床随诊结果为金标准,比较FISH与常规细胞学对肿瘤诊断的价值。用Real-Time PCR和Western Blot方法检测QBC939、GBC-SD、CC-HEL-1细胞株和组织分离的胆道上皮细胞及肝细胞AURKA基因表达的情况,比较不同细胞中AURKA mRNA和蛋白水平的差异。同时,用免疫组化方法检测29例胆管癌组织中AURKA的表达情况,并与炎性胆道组织对比,分析AURKA表达水平与肿瘤病理分期和组织学分级的相关性。结果荧光原位杂交结果显示:胆道肿瘤细胞株及胆管癌组织内存在广泛的细胞染色体非整倍体改变,而正常组织细胞内染色体基本呈二体性。应用UroVysion探针通过FISH技术检测27例胆管细胞刷标本的3号、7号、17号和9p21基因位点,以染色体数目异常为阳性判定标准(即:多条染色体多体性细胞≥5个或单染色体三体性细胞≥10个),其对胆道肿瘤的诊断敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为:50%、100%、100%、31.3%;而常规细胞学诊断的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为:22.7%、100%、100%和22.7%,二者比较,没有达到统计学差异(P=0.146)。在本研究中,3号染色体多体性是FISH阳性患者染色体异常的主要形式,并且可以见到9p21的纯合缺失。用Real-Time PCR和Western Blot方法分别检测AURKA mRNA和蛋白水平,结果发现:在肿瘤细胞株QBC939和GBC-SD中,AURKA的表达水平明显高于胎肝细胞和正常胆道上皮及肝细胞;免疫组化染色显示AURKA在胆管癌组织中表达增加,且AURKA表达量与肿瘤病理分期和组织学分型具有相关性。结论胆管癌中广泛存在细胞非整倍体改变。通过荧光原位杂交检测可以在一定程度上提高胆道细胞刷的肿瘤诊断率;AURKA在胆管癌中表达水平明显增高,且其表达量与胆管癌的生物学行为有关联。推测AURKA可能通过引起细胞染色体的非整倍体改变参与胆管癌的发生。