伪狂犬病（Pseudorabies,PR）,也可以称为奥耶斯基病（Aujeszky disease）,是由伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的急性、高度接触的病毒传染病,特别是仔猪在感染后死亡惨重,给养猪业造成巨大的损失。伪狂犬病毒在分子结构、蛋白构型等生物学方面均有较为深入的研究报道,却欠缺在长链非编码RNA（Long noncoding RNA,Lnc RNA）层面的研究成果。Lnc RNA是当前的研究热点,学者们一度强调Lnc RNA参与着多种疾病的形成,而核旁斑组装转录物1（Nuclear paraspeckle assembly transcript 1,NEAT1）是目前研究较为深入的一种Lnc RNA,不仅在炎症、免疫、肿瘤等的形成过程中发挥了重要的作用而且参与调控病毒的复制,但是NEAT1基因在兽医领域里的相关研究报道罕见,关于其在PRV方面的研究更是空白,对PRV与Lnc RNA NEAT1之间存在的关联并不明确,因此本研究尝试对PRV与Lnc RNA NEAT1之间的相互作用展开科学探索。为明确PRV与Lnc RNA NEAT1互作现象,本研究首先利用荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,RT-q PCR）方法分别检测GAPDH、UBC、RPL32、RPL3、LDHA、HPRT1、HSBM等六个基因在仔猪心脏、肝脏等13个组织内的m RNA表达情况,筛选在所述组织中均能稳定表达的内参基因,用于比较仔猪NEAT1基因在13个组织中表达的差异,然后使用表达水平最丰富的组织为样本,克隆猪NEAT1部分基因序列并进行生物信息学分析。在此基础上,根据PRV的病毒生长曲线检测病毒感染PK15细胞前后NEAT1的表达变化,同时采用感染复数MOI=0.1的PRV感染过量表达或者沉默表达的NEAT1基因后的PK15细胞,应用TCID50的方法分析PRV复制水平的变化。此外,为了进一步明确NEAT1对PRV的复制的影响,本研究开展了NEAT1基因过量表达或者沉默表达对Wnt/β-catenin通路下游基因c-myc、Cyclin D产生的影响。结果表明:上述管家基因在所选择的13种组织中表达稳定性依次为:RPL3>RPL32>UBC>HSBM>HPRT1>GAPDH>LDHA,即RPL3基因在13种组织中相对稳定性最高。仔猪体内各组织中NEAT1基因的表达水平如下:骨骼肌>脾脏>大肠>小肠>心脏>肝脏>肾脏>肺门淋巴结>肺脏>大脑>气管>胰脏>小脑,运用NEAT1基因表达最丰富的骨骼肌为样本克隆出10725 bp的基因序列。根据克隆的基因序列对PRV感染组与未感染组相互比较,感染组细胞中的NEAT1基因在感染后出现不同程度的升高,并且在感染后10 h取得最高水平,而当PK15细胞中的NEAT1基因过量表达使得PRV的复制水平下降,说明其可以抑制PRV在细胞内的复制水平。本研究同时表明Wnt/β-catenin通路的下游基因Cyclin D会随着NEAT1基因的沉默在细胞内发挥作用从而表达水平略微升高,同时NEAT1基因过表达质粒也可以影响Cyclin D基因的表达水平,使其表达水平极低,这一结果表明NEAT1基因的过量表达可能是通过Wnt/β-catenin通路的下调作用进而使PRV的复制水平降低。综上所述,本研究获得长度为10725 bp的NEAT1部分基因,筛选获得在多组织内稳定表达的内参基因为RPL3。同时揭示,PRV感染组细胞中的NEAT1基因在感染后出现不同程度的升高。NEAT1基因表达量的上升会抑制PRV复制水平,其作用方式可能是通过Wnt/β-catenin信号通路下游基因Cyclin D和cym-c的下调发挥作用。