双水相萃取消除蛋白质对测定血浆中药物影响的研究

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血浆中药物的分析主要包括药物提取和检测,现有的科技水平下,仪器基本已经能够满足测定的要求,因此制约血浆中药物浓度检测的关键是实现药物的快速准确提取。本文对现有血浆中药物的提取技术进行了综述,以分子荧光光谱法详细研究了抗精神病类药物与人血清白蛋白(HSA)的相互作用,以瑞利散射光谱研究了不同浓度乙醇对蛋白质变性的影响,阐明待测药物在血清中的存在状态,为血浆中药物的提取提供理论依据,并详细研究了乙醇-K2HPO4-水双水相形成的条件并利用该体系测定酒精类饮料的酒精度;利用该体系基质去除与高效液相色谱(HPLC)检测技术建立了检测血清样品中抗精神病类等药物的方法。论文主要分为五部分:第一部分:对血浆中药物的提取方法和双水相体系在药物萃取等方面的应用进行综述,阐明了课题的研究内容和意义。第二部分:考察7种常见的无机盐对乙醇-水溶液产生相分离的影响,实验结果表明磷酸氢二钾分相能力最强。通过研究常压、25℃条件下乙醇-K2HPO4-水体系的相图得知,任意体积分数的乙醇-水溶液均可在加入适量的磷酸氢二钾后形成双水相。因此可在酒精类饮料中加入磷酸氢二钾使其形成双水相后,通过测量上相体积来分析饮料中的酒精含量。葡萄酒中的色素、单宁对测定有影响,可籍加入ADS-8吸附树脂和铬皮粉消除。应用本方法成功测定了白酒、葡萄酒、白兰地酒的酒精度,方法简单、快捷,样品测定标准偏差小于3.0%,回收率为99.2%-101.6%,可以满足酒精类饮料酒精度标称含量偏差小于±1.0度的分析要求。第三部分:以HSA为典型蛋白质,研究了蛋白质对测定血清样品中抗精神病类药物(APDs:安定、盐酸氯丙嗪及奋乃静)的影响。以分子荧光光谱法详细研究了抗精神病类药物与HSA的相互作用,以瑞利散射光谱研究了不同浓度乙醇对蛋白质变性的影响。研究结果表明:药物与HSA存在牢固结合作用,体积分数为80%的乙醇水溶液作为萃取液可以使血清中蛋白质缓慢的变性,从而充分释放与蛋白质结合的药物。本文以乙醇水溶液为萃取液提取血清样品中的APDs,加入K2HPO4无机盐后可形成双水相体系,APDs进入双水相上相实现药物的均相高效萃取。上相经0.45μm滤膜过滤后可直接用高效液相色谱检测。该方法用于人血清中3种抗精神病类药物的萃取检测,检出限为18.838.4ng·mL-1,回收率为94.2%98.7%。第四部分:以人血清白蛋白为典型蛋白质,利用分子荧光光谱法研究了蛋白质在不同百分含量乙醇中的溶解度,进一步阐明了乙醇对血浆中药物萃取的影响。利用乙醇-K2HPO4-水双水相体系HPLC法对人血清中硝苯地平、尼群地平及尼莫地平的萃取检测,检出限为10.414.8ng·mL-1,回收率为86.2%94.7%。第五部分:利用乙醇-K2HPO4-水双水相体系HPLC法萃取测定人血清中苄氟噻嗪、环戊噻嗪及氯普噻吨。
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