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microRNA(miRNA)是一类内源性长约19-25nt(核苷酸)的非编码微小核糖核酸,它能在转录后水平上调控基因的表达。miRNA在生物体内普遍存在并参与调控许多生命过程,包括细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡、个体发育、疾病发生、基因调控及代谢。miRNA的异常与人类肿瘤疾病相关,因而,在肿瘤疾病中定量检测miRNA能为肿瘤的诊断、治疗与预后提供依据。分子信标因特异性强、灵敏度高、操作简单快速等特点,成为最理想的定量检测miRNA的工具之一。本文主要致力于基于分子信标定量检测miRNA的研究,主要内容如下：1.分子信标直接检测肿瘤相关的miRNA-204本章利用以miRNA-204为靶标的分子信标,通过优化分子信标稳定性、杂交性能、特异性的条件,构建MB/miR-204杂交标准曲线,建立了一种快速、安全、特异的miRNA-204定量检测新方法,该方法检测线性范围在1-100nM,检测下限达到1nM。将其用于肿瘤细胞和胶质瘤组织中的miRNA-204表达变化定量检测,发现miRNA-204在MCF-7细胞和胶质瘤组织中下调,为深入阐明miRNA-204在肿瘤发生中的作用提供了可靠的实验依据。2.分子信标结合DSN介导的高灵敏miRNA-204检测本章利用DSN酶的特点,设计了DNA与RNA嵌合的分子信标,通过考察酶促介导信号放大体系的影响因子,优化了实验条件,建立了检测下限在pM级的高灵敏检测miRNA-204的方法。运用分子信标结合DSN的检测体系,定量检测肿瘤细胞和胶质瘤组织中miRNA-204的表达水平,结果发现与直接检测一致,表明该体系准确可靠。此方法为无创检测临床样品、研究miRNA功能、疾病的早期诊断与预后提供新的检验手段。3.分子信标检测肿瘤相关的Pre-miR-21本章我们通过优化MB/Pre-miR-21杂交的实验条件,考察MB的特异性,构建检测Pre-miR-21的标准曲线,建立了一种分子信标检测发夹结构的前体miRNA--Pre-miR-21的新方法。将其应用到检测MCF-7细胞、胶质瘤、胃癌中Pre-miR-21的表达水平,并以qRT-PCR验证其准确性。结果发现：MCF-7细胞中干扰Z38基因表达能使Pre-miR-21表达上调；胃癌癌组织比癌旁组织Pre-miR-21表达水平高；胶质瘤中恶性程度越高Pre-miR-21表达越高,呈正相关趋势。分子信标在Pre-miR-21检测中表现出良好的应用前景。