利迪链霉菌对外源谷氨酸和脯氨酸的代谢响应研究

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外源谷氨酸和脯氨酸的添加极大地促进了利迪链霉菌E9发酵中利迪链菌素的产量。本文通过考察外源氨基酸对利迪链霉菌代谢组和蛋白质组带来的扰动,揭示了谷氨酸和脯氨酸促进利迪链菌素生产的机制,同时本文还对利迪链霉菌所产的抗真菌活性物质做了初步的定性研究。主要研究结果为:1)利迪链霉菌发酵过程中,外源谷氨酸(100mg/L)和脯氨酸(100mg/L)的添加分别提高了56.8%和49.5%的利迪链菌素产量。通过GC-TOF MS对利迪链霉菌添加外源氨基酸后不同发酵时期(12h,24h,72h)的胞内代谢物进行分析,总共对53种差异表达代谢物进行了定性定量考察。通过PCA分析发现影响利迪链菌素产量的7种潜在生物标志物有:缬氨酸,甘氨酸,丙氨酸,葡萄糖,正十六酸,硬脂酸,cAMP。2)利用二维色谱结合飞行时间质谱(2D-LC-MS/MS)及同位素标记相对定量技术(iTRAQ)对添加谷氨酸和脯氨酸的利迪链霉菌发酵12h的胞内蛋白进行定量分析,共检测到318种蛋白质,对其中98种蛋白进行了定量分析。发现外源谷氨酸和脯氨酸的添加会导致蛋白水平显著下降,尤其是谷氨酸的添加。这些差异表达的蛋白主要是参与核糖体结构蛋白、翻译蛋白以及与利迪链菌素合成相关的氨基酸代谢和碳代谢相关的蛋白。3)通过对利迪链霉菌所产的抗真菌活性物质的定性分析,发现此类活性物具有分解β-1,3葡聚糖的功能,同时通过简单的浓缩离心步骤得到了该活性物质的初步分离产物,运用SDS-PAGE电泳分析初步确定其分子量约为2500Da左右。上述研究从代谢物组和蛋白质组两方面揭示了外源氨基酸在促进利迪链菌素产量的同时对利迪链霉菌胞内分子带来的扰动,同时也对抗真菌活性物质进行了定性研究及提出初步的分离纯化方法,可以为利迪链霉菌两种抗生素的增产和鉴定提供实验依据。
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