基于适体和DNA连续复制的生物传感器

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本论文的主要内容是基于适体的特异性并利用纳米技术与DNA分子杂交技术、DNA循环复制相结合,研制出高灵敏度、高选择性的新型适体传感器,对特定生物分子如凝血酶、腺苷、溶菌酶进行选择性地识别和测定,为许多疾病的临床早期诊断提供理论基础。本文着重进行了以下几种靶物质的适体传感器的研制和性质研究:1.以粒径为4 nm左右的硫化镉纳米颗粒为标志物,设计了以适体识别为基础、以两步DNA复制步骤构成的循环反应放大体系,用于进行凝血酶的检测。该适体传感器对凝血酶有良好的选择性,确定检测限约为5×10-14 M,从2×10-14 M到10-12 M的范围内可以对凝血酶进行定量测定。2.以粒径为5 nm左右的硫化铅纳米颗粒为标志物,设计了以适体识别为基础、以两步DNA复制步骤构成的循环反应放大体系,用于进行腺苷的检测。该传感器对腺苷有良好的选择性,确定检测限约为5×10-11 M,从2×10-11 M到10-9 M的范围内可以对腺苷进行定量测定,并可以对血清样品中的腺苷进行检测的通过高效液相的对比检测,验证了该方法的准确性和高灵敏度。3设计新型循环体系,同时使用剪切酶和复制酶,在体系中实行了多层次放大和8个循环,设计的适体传感器对溶菌酶有良好的选择性,确定检测限约为8.1×10-15 M,并对人类血清样品和尿液样品中的溶菌酶进行检测,体现了该方法的准确性和实用性。本文所创建的是一种以适体为基础依靠DNA循环复制替换的传感器,在整个复制体系中,实现了多个多层次的循环,并且这个大的体系仅由唯一的靶物质引发反应,并且反应过程简单,只需要混合在一起“一锅煮”。本文中不仅实现了DNA片段的复制替换,并且实现新的大分子与核酸(适体链)的替换,并且得到充分验证,整个大体系也明显改善了检测的灵敏度,在逐级循环过程中,大大提高了传感器的灵敏度,本体系的选择性非常好,因为整个体系的设计是在适体基础上,适体的特异性选择得到了充分的验证,本传感器可以实现特定蛋白质等大分子物质的检测,并有望延伸到生物医学研究或临床诊断等领域。
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