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猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的一种高度接触性传染病，以母猪的生殖障碍和生长猪及仔猪的严重呼吸道疾病为主要特征。是目前危害养猪业最严重的传染病之一。PRRSV属于尼多病毒目、动脉炎病毒科，为有囊膜的不分节段、单股、正链RNA病毒。 该病毒有4种糖基化蛋白GP2、GP3、GP4和GP5，以及2种非糖基化蛋白M和N蛋白，其中GP5蛋白是PRRSV的主要保护性抗原，在动物体内可诱导产生中和抗体。GP5蛋白的外结构域中有一个高度保守的线性中和表位，即B表位(Aa37-45)(HLQLIYNL)和一高变异性的免疫优势非中和表位称为A表位，A表位的核心(Aa27-31)(A／VLAN)位于B表位的七个氨基酸之前。 为进一步研究GP5蛋白中和表位与非中和表位的关系，本研究根据GenBank数据库中的PRRSV S1毒株GP5的基因序列，设计合成了一对含有BamHI、EcoRI酶切位点的引物，PCR扩增其A、B抗原表位141bp双链DNA序列，分别克隆于原核表达载体pGEX-6p-1和真核表达载体pcDNA3中，经酶切鉴定及DNA序列测定，插入片段具有正确的阅读框。原核重组质粒pGEX-GP5AB转化大肠杆菌(E. coli)BL21感受态细胞，以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)18℃诱导表达融合蛋白GST-GP5AB。SDS-PAGE电泳显示相对分子质量为30KD。用GSTrap FF亲和层析柱获得的纯化的蛋白，经Western blotting检测证明该重组蛋白具有良好的抗原性。将纯化的重组蛋白GST-GP5AB和真核表达质粒pcDNA3-GP5AB分5次免疫BALB／c小鼠，每次间隔3周，最后一次免疫后用ELISA、病毒中和试验和Westem blot检测抗PRRSV抗体。结果表明，重组GST-GP5AB蛋白可诱导产生PRRSV特异性ELISA抗体，获得的血清效价大约为1：880，经GST蛋白孵育后效价为1：400。Western-blot结果显示该融合蛋白与经过空载体pGEX-6p-1表达的GST蛋白孵育的抗血清反应后有明显的特异性条带。但是此抗体没有中和活性。同时，pcDNA3-GP5AB不能诱导免疫鼠产生PRRSV特异性抗体。 利用GST-GP5AB重组蛋白作为包被抗原，通过反应条件优化，建立间接ELISA