目的:探讨活体五谷虫促进大鼠感染创面的愈合作用,及其可能的分子机制。方法:(1)考察活体五谷虫对大鼠感染创面的作用。选用雄性SD大鼠,体重200g左右,在大鼠背部逐层剪开皮肤全层及皮下浅筋膜,制作一个2cm×2cm的创面,创面滴加金黄色葡萄球菌标准菌株菌液建立感染创面模型。根据对感染创面处理的不同,将大鼠随机分为三组:1.阴性对照组,即凡士林纱布覆盖组,该组大鼠感染创面用无菌凡士林纱布覆盖;2.阳性对照组,即莫匹罗星组,该组大鼠感染创面用莫匹罗星软膏均匀涂抹,并用无菌凡士林纱布覆盖;3.五谷虫虫包组,该组大鼠用五谷虫虫包包埋于创面,并用无菌纱布覆盖。在各自方法处理的第4、8、12天,观察三组大鼠创面的一般情况,包括创面的大小变化,感染情况以及肉芽组织新生的变化;应用改良透明膜法对大鼠创面面积进行记录;对创面组织处理后进行孵育来反应创面的菌落数,以评价创面感染情况;选取创面组织行HE染色,观察创面的组织病理学改变。(2)探讨活体五谷虫促进大鼠感染创面愈合的可能分子机制。动物分组、模型建立同第一部分实验。实验的第4、8、12天,在组织水平上,三个时间点选取合适的组织行HE染色以及免疫组织化学,分别考察组织病理学改变以及TGF-β/SMAD通路的表达改变情况;在分子水平,在三个时间点上选取合适的组织,提取组织蛋白,考察TGF-β/SMAD通路上TGF-β、SMAD2/3、SMAD4的改变,以及其下游的靶基因Ras、C-myc的改变。(3)考察活体五谷虫促进大鼠感染创面血管生成的作用。动物分组、模型建立同第一部分实验。在处理的第4、8、12天,HE染色对其组织病理学改变进行评价;用免疫组织化学方法观察创面组织中VEGF-A的表达;选取合适的创面组织,提取组织的RNA和蛋白,分别在基因和蛋白水平考察活体五谷虫对大鼠感染创面血管新生的影响。(4)探讨活体五谷虫促进大鼠感染创面神经新生的作用。动物分组、模型建立同第一部分实验。在处理的第4、8、12天,HE染色观察三组大鼠创面组织学变化。另外,用免疫组织化学方法考察神经元特异性抗原蛋白基因产物9.5(PGP9.5)以及神经肽P物质(SP)的在创面的表达情况。结果:(1)在治疗的第4天,莫匹罗星软膏组较其他两组创面面积最小(P<0.05),创面细菌含量最少(P<0.05),HE结果也可看出炎症细胞明显少于其它两组;而在第8和第12天,五谷虫虫包组逐渐展现出与莫匹罗星阳性对照组相当甚至更优的治疗作用,具体体现在:第8和第12天,活体五谷虫组创面面积追赶上莫匹罗星阳性对照组,二者间无统计学差异,但均优于凡士林纱布组(P<0.05);第8和第12天,活体五谷虫组创面细菌含量明显低于两对照组(P<0.05);HE染色呈现的炎症细胞亦较对照组少。(2)在第4天,莫匹罗星组的TGF-β/SMAD信号通路蛋白表达高于五谷虫虫包组以及阴性对照组(P<0.05),莫匹罗星阳性对照组的组织病理学情况更优;随着治疗时间的延长,五谷虫虫包组的TGF-β/SMAD通路蛋白的表达逐渐升高,第8天表达和莫匹罗星组相当,而在第12天,表达明显高于莫匹罗星组(P<0.05),HE染色也证实了五谷虫虫包组大鼠创面恢复的更好。因此,可以证明,活体五谷虫促进大鼠感染创面的愈合与TGF-β/SMAD信号通路的活化相关。(3)在第4天,莫匹罗星阳性对照组的VEGF-A蛋白表达与五谷虫虫包组以及阴性对照组表达无明显差异,但莫匹罗星组的组织病理学情况更优;随着治疗时间的延长,五谷虫虫包组的VEGF-A蛋白的表达逐渐升高,在第12天,表达已经明显高于莫匹罗星组(P<0.01),大鼠创面HE染色也证实了五谷虫虫包组大鼠创面愈合的更优。因此,可以证明,活体五谷虫通过激活VEGF-A增加血管新生来促进大鼠感染创面的愈合。(4)在第4天,莫匹罗星组的PGP9.5和SP的表达与五谷虫虫包组以及阴性对照组无明显差异,其中莫匹罗星组的组织病理学情况更好。随着治疗时间的延长,五谷虫虫包组的PGP9.5和SP的表达逐渐升高,第8天表达和莫匹罗星组相当,而在第12天,表达已明显高于莫匹罗星组(P<0.05),大鼠创面HE染色也证实了五谷虫虫包组大鼠创面恢复的更好。因此,可以证明,活体五谷虫通过增加神经新生来促进大鼠感染创面的愈合。结论:活体五谷虫能够明显改善大鼠感染创面的炎症情况并促进创面愈合。具体的分子机制为:活体五谷虫通过激活TGF-β/SMAD信号通路,增加下游促生长基因的表达,促进大鼠感染创面血管新生以及创面神经再生,从而促进大鼠感染创面的愈合。