蝇蛆壳来源壳聚糖的制备及其性质研究

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蝇蛆壳(也叫蛆皮)中含有大约30%~54.8%的甲壳素,石灰石、蜡质、碳酸盐和重金属的含量较低,色素少,是极好的甲壳素原料。壳聚糖是甲壳素的脱乙酰基产物。壳聚糖由于其天然无毒、功能多样化,已在许多领域得到广泛应用,目前国内外对壳聚糖的需求量不断扩张,已成为最热门的研究领域之一。本论文以蝇蛆壳为原料,研究了壳聚糖的制备及分离纯化条件,并对壳聚糖的抑菌活性进行了研究。主要研究内容、方法和结论如下:(1)以蝇蛆壳为原料,经过脱无机盐、脱蛋白、脱色处理,得到达工业级别的白色或微黄色(极少数颜色较深)的片状甲壳素,得率为17.58±0.03%。(2)从甲壳素出发,在碱液作用的条件下使甲壳素充分脱除乙酰基,制备较高脱乙酰度和黏度的壳聚糖,在单因素试验的基础上,采用响应面分析法确定了甲壳素脱乙酰的最优条件为:碱液浓度50%,液料比(v/w)57.49:1,反应时间7.3h,反应温度100℃。在此条件下所得壳聚糖脱乙酰度和黏度分别为80.24%和50351.23mPa S,与模型的预测值分别相差1.48%和2.48%,说明该模型合理可靠。(3)从甲壳素脱乙酰产物出发,利用醋酸溶液提取壳聚糖,通过单因素试验研究了醋酸浓度、提取时间、提取温度、pH值以及液料比对壳聚糖得率的影响,在此基础上,采用响应面分析法确定了醋酸提取壳聚糖的最佳条件为:醋酸浓度10.42%、反应时间3.33h、液料比为40.33:1、反应温度为50℃、pH值为7.0,在此条件下,壳聚糖得率为87.50±1.05%。(4)在上述结论的基础上进行制备蝇蛆壳壳聚糖的中试试验,得到超高黏度、中脱乙酰度的壳聚糖,且其他指标达工业级要求。(5)采用中试试验所得壳聚糖,进行壳聚糖的抑菌性研究。研究了蝇蛆壳壳聚糖在不同浓度和pH值时分别对醋酸菌、乳酸菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用。结果表明:壳聚糖溶液浓度在1mg/mL~50mg/mL范围内,壳聚糖对乳酸菌、醋酸菌的抑制作用随着溶液浓度的增加而增强;对大肠杆菌的抑制作用随着溶液浓度的增加而减弱;在浓度为5mg/mL时,对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强;在浓度为10mg/mL时,对枯草芽孢杆菌的抑制作用最强。相同浓度的壳聚糖溶液对金黄色葡萄球菌的抑制能力最强,其次是大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、乳酸菌,对醋酸菌的抑制能力相对弱一些。在pH值4.0~7.0范围内,随着溶液pH值的升高,壳聚糖对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用均逐渐减弱。在pH5.5至6.0时,壳聚糖对大肠杆菌的抑制作用最强。(6)采用SephacrylTMS-300凝胶层析分离纯化蝇蛆壳壳聚糖,通过单因素试验确定了最佳洗脱条件为:洗脱剂0.05M乙酸-乙酸钠缓冲液,上样量5mg/mL壳聚糖溶液15mL,洗脱流速0.5mL/min,在此条件下壳聚糖溶液分离得到分子量分别为620kDa和230kDa的两个组分,经纯度的测定分析及高效液相分析,所得组分较纯,可见此法效果良好。并对SephacrylTMS-300凝胶层析分离到的两个组分进行了红外光谱分析和晶型结构分析,结果表明,在红外光谱图中两组分均出现了壳聚糖官能团的特征吸收峰;组分1结晶度较低,组分2结晶度较高。
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