2005年初,韩国从宠物狗中分离出一株禽源H3N2流感病毒,这是H3N2犬流感病毒首次出现在人们的视线中,自2006年以来,在中国南方越来越多的宠物犬感染H3N2 CIV病毒的病例被报道出来,但我们对H3N2 CIV的致病机制仍不清楚。本试验以一株于伴有呼吸道症状的病犬中分离获得的一株H3N2 CIV病毒株,简称C1732株,作为疫苗种毒株,分别用铝制佐剂和201佐剂制备油乳剂灭活疫苗对其免疫效果进行研究。全长基因组测序分析结果表示C1732株与BLAST公布的犬流感全基因序列高度同源。病毒接种MDCK细胞培养特性试验结果表明,C1732株最佳接毒量为0.1MOI/T75,最佳收毒时间为接种后72h,半数组织细胞感染量(TCID50)为107.3/0.1mL。病毒鸡胚培养特性试验结果表明,C1732株最佳接毒量为0.1 mL/枚,最佳收毒时间为接种后48h。鸡胚半数感染量(EID50)为 107.2/0.1mL。攻毒用强毒株的致病性试验结果表明,鼠适应强毒株鸡胚接种后细胞半数感染量(TCID50)为107.5/0.1 mL,对BALB/c小鼠进行攻毒试验表明,鼠适应强毒株的半数感染剂量(MID50)为105TCID50,0.05 mL/只,攻毒后1天就表现出毛发竖立、精神萎靡等临床症状,在攻毒3d后开始死亡。用于制备抗原的鸡胚毒HA滴度最高能达到7log2,细胞毒HA最高滴度能达到10log2,所以选择细胞毒作为灭活疫苗的抗原。将C1732株H3N2 CIV接种MDCK细胞,并分开收集细胞液用来制备灭活疫苗,鸡胚毒分别用sigmen铝制佐剂和seppic201佐剂制备,细胞毒同样用以上两种佐剂制备,灭活疫苗制备完成后对疫苗的形状、安全性以及免疫效果进行研究。安全性试验结果表明,单剂量和多剂量接种BALB/c小鼠安全性试验表明小鼠接种后安全无应激反应。免疫抗体水平试验结果表明,小鼠按推荐剂量免疫后在7d后可检测到抗体,配合201佐剂最佳免疫剂量为105EID50/0.1 mL,配合铝制佐剂最佳免疫量为106EID50/0.1 mL;细胞种毒和鸡胚种毒未见明显差别;最佳免疫方式为肌肉注射;其中201佐剂在4周时达到峰值9.5log2,铝盐佐剂在4周时的峰值为9.3log2,之后逐渐下降。免疫保护效果试验结果表明,攻毒组在3d的时候小鼠出现死亡,10d时攻毒组小鼠已经全部死亡;剂量为105EID50/0.1 mL的配合201佐剂的灭活疫苗和剂量106EID50/0.1 mL配合铝制佐剂的灭活疫苗,在同等攻毒条件下体重略有下降,但未出现死亡情况,保护率均为100%。但因为铝盐佐剂灭活疫苗组的体重下降率明显大于201油性佐剂灭活组,且铝盐佐剂价格非常昂贵,作为动物疫苗的佐剂运用并不实际,所以综合分析认为,seppic201佐剂更适合作为H3N2犬流感病毒灭活疫苗的佐剂。