论文部分内容阅读
目的：探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)对气阴两虚型难治性免疫性血小板减少症(rITP)患者B淋巴细胞分化及免疫功能的影响。方法：按照患者纳入及分组标准,将rITP患者分为气阴两虚型组和非气阴两虚型组,健康供者为对照组；用酶消化法提取健康胎儿脐带间充质干细胞；MTT法测hUC-MSCs生长曲线；人外周血淋巴细胞分离液密度梯度离心法提取健康供者及rITP患者外周血单个核细胞；流式标记CD44、CD31和CD19分别检测hUC-MSCs纯度和外周血B淋巴细胞数；ELISA法确定美洲商陆(PWM)刺激外周血B细胞分化为浆细胞分泌抗体所需的浓度、时间,hUC-MSCs和单核细胞共培养的比例,检测健康供者组、气阴两虚型组和非气阴两虚型组患者外周血B细胞分化为浆细胞分泌IgG、IgM的含量；通过EnVision免疫组化法测每组CD138标记的细胞阳性率确定Blimp-1蛋白表达程度。结果：(1)以酶消化法从健康胎儿脐带提取的贴壁细胞主要为间充质干细胞,其纯度为99.8%,人外周血淋巴细胞分离液密度梯度离心法提取的外周血单个核细胞中B细胞占6.9%。(2)PWM可刺激人外周血B细胞分化发育为浆细胞分泌抗体,且呈PWM浓度依赖性；在PWM刺激4天时,浆细胞分泌抗体量最多；PWM浓度为30ug/mL作用4天时健康供者组IgG、IgM分泌量明显增加(P=0.033,P=0.010);PWM为30ug/mL,作用4天时气阴两虚型组IgG、IgM分泌量高于非气阴两虚型组(P=0.013,P=0.008)和健康供者组(P=0.001,P=0.004),非气阴两虚型组IgG、IgM分泌量和健康供者组无明显差异(P=0.077,P=0.587)。(3)hUC-MSCs和外周血单个核细胞共培养可减少B细胞分化发育为浆细胞时分泌IgG、IgM的量。①无hUC-MSC刺激气阴两虚型组IgM分泌量明显高于健康供者组(P=0.004),非气阴两虚型组IgM分泌量较健康供者组无明显差异(P=0.587);②hUC-MSCs:外周血单核细胞为2:10时,气阴两虚型组IgM分泌量较无hUC-MSCs时明显减少(P=0.001),非气阴两虚型组IgM分泌量与无hUC-MSCs无明显差异(P=0.073)；气阴两虚型组、非气阴两虚型组IgM分泌量与健康供者组比无明显差异(P=0.055,P=0.51)；③无hUC-MSCs刺激,气阴两虚型组IgG分泌量明显高于健康供者组IgG分泌量(P=0.001),非气阴两虚型组IgG分泌量较健康供者组无明显差异(P=0.077)；④hUC-MSCs:外周血单核细胞2:10时气阴两虚型组IgG分泌量较无hUC-MSCs明显减少(P=0.000),非气阴两虚型组IgG分泌量较无hUC-MSCs无明显差异(P=0.446),气阴两虚型组IgG分泌量较健康供者组无明显差异(P=0.848),非气阴两虚型组IgG分泌量高于健康供者(P=0.007)。(4)hUC-MSCs抑制Blimp-1蛋白的表达。气阴两虚型组和非气阴两虚型组CD138标记细胞阳性率在hUC-MSCs:外周血单核细胞为2:10和无hUC-MSCs时明显下降(P=0.000,P=0.026),气阴两虚型组CD138阳性细胞率和健康供者组比无明显差异(P=0.076),非气阴两虚型组CD138阳性细胞率高于健康供者组(P=0.029)。结论：hUC-MSCs口rITP患者外周血单核细胞以一定比例共培养,可减少气阴两虚型组和非气阴两虚型组IgM的分泌量,减少气阴两虚型组IgG分泌量,降低气阴两虚型组和非气阴两虚型组CD138标记的阳性细胞,可以认为hUC-MSCs对rITP患者尤其是气阴两虚型患者B细胞分化为浆细胞分泌抗体有一定的抑制作用,但临床治疗rITP仍需继续探索。