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目的:本研究主要分析碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE菌株)耐药的分子机制及相关危险因素。方法:收集福建医科大学附属协和医院2011年8月至2012年8月临床分离非重复CRE菌株,检测其厄他培南(ETP)、亚胺培南(IPM)及美罗培南(MEM)的最低抑菌浓度(MIC)筛查菌株;采用改良Hodge试验及组合纸片法进行碳青霉烯酶表型鉴定、琼脂稀释法测其药敏;聚合酶链反应(PCR)扩增超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、碳青霉烯酶和头孢菌素酶(AmpC)耐药基因;采用肠杆菌基因间保守重复序列-聚合酶链反应(ERIC-PCR)对菌株进行同源性分析;对检出碳青霉烯类基因的CRE菌株进行接合实验了解其传递性;最后通过调查感染CRE菌株患者的临床病例资料以了解其感染的相关危险因素。结果:共筛查出109株CRE菌株,其中肺炎克雷伯菌41株,阴沟肠杆菌29株,大肠埃希菌21株,摩根摩根菌5株,产酸克雷伯菌5株,奇异变形杆菌3株,普通变形杆菌2株,黏质沙雷菌2株,产气肠杆菌1株;改良Hodge试验检出70例产碳青霉烯酶;组合纸片法检出单产金属酶34株,单产KPC酶11株,1株同时产金属酶和KPC酶。41株肺炎克雷伯菌、29株阴沟肠杆菌和21株大肠埃希菌对厄他培南/亚胺培南耐药率分别为97.6%/73.2%、75.9%/62.1%、76.2%/57.1%,对头孢西丁耐药率为100%,对头孢菌素及氨曲南的耐药率高达90%左右。其他18株CRE菌株对亚胺培南耐药率高达94.4%,而对美罗培南全部敏感。依据ERIC-PCR分型结果41株肺炎克雷伯菌可分为33个不同型别;29株阴沟肠杆菌可分为23个不同型别;21株大肠埃希菌可分为13个不同型别。接合实验发现:54株检测出碳青霉烯酶基因的CRE菌株有33株接合成功。耐药基因经扩增及测序检出产碳青霉烯酶基因共54株,其中单产IMP型酶基因有40株(40.37%,44/109),分别为IMP-4型酶基因26株,IMP-8型酶基因14株。有1株细菌同时携带IMP-4和NDM-1基因。有2株CRE菌株同时产IMP-8和KPC-2。单产NDM-1型酶基因检出4株(4.58%,5/109)。单产KPC型酶基因有7株(6.42%,7/109),均为KPC-2。TEM型检出66株,均为TEM-1型;SHV型48株阳性,其中20株SHV-12,14株SHV-11,7株SHV-26,2株SHV-28,2株SHV-31,1株SHV-1,1株SHV-2和1株SHV-33;CTX-M-9组24株阳性,其中17株CTX-M-14,7株CTX-M-65。CTX-M-1组17株阳性,其中7株CTX-M-115,5株CTX-M-79,3株CTX-M-3,2株CTX-M-22;10株CRE细菌产AmpC酶,其中单产CIT型酶基因7株,单产MOX型酶基因2株,1株同时含EBC和CIT型酶基因。69.15%(65/94)的患者住院期间更换床位一次或以上,并且28.72%(27/94)患者更换床位三次及以上;96.81%(91/94)有过创伤性的操作;56.38%(53/94)患者同时合并感染多种耐药菌株。使用碳青霉烯类、喹诺酮类、氨基糖苷类、头孢菌素类、内酰胺类和其他类别抗生素(如四环素类、恶唑烷酮类、磷霉素类、抗真菌类、四环素类、磺胺类和万古霉素类等)的患者数分别占47.87%(45/94)、44.68%(42/94)、24.47%(23/94)、55.32%(52/94)、57.45%(54/94)、42.55%(40/94)。结论:分离自福建医科大学附属协和医院的CRE菌株主要以肺炎克雷伯菌为主,其耐药机制主要为产金属酶,且耐药菌株之间不借助质粒在菌株之间传递。换床次数及开创性操作尤其静脉置管是造成CRE菌株耐药的主要危险因素。