里氏木霉(Trichoderma reesei,红褐肉座菌的无性型)是重要的纤维酶和半纤维素酶生产菌,具有强大的合成蛋白及分泌能力。小分子RNA广泛存在于真核生物中,起调控基因表达的功能。近年来,在真菌中已发现多种小分子RNA,如粗糙脉孢霉(Neurospora crassa)中的qi RNAs、mil RNAs(micro RNA like RNAs)、T.reesei中的mil RNA等。为找出参与纤维素酶表达调控功能的小分子RNA,本工作的前半部分工作在前期研究的基础上挑选了3个T.reesei QM9414的小分子RNA(mil RNA),对它们过表达和抑制,并进行功能上的验证。研究方法为构建过表达载体和mi RNA诱饵Tough Decoy(Tu D)序列,将重组质粒转入T.reesei QM9414获得重组菌株。接着对重组菌株的小RNA表达情况及纤维素酶表达情况进行了分析。RT-PCR(Real Time PCR)的结果表明,过表达载体能提高小分子RNA的表达量,Tu D序列表达载体可以抑制小分子RNA的功能;对重组菌株产纤维素酶能力分析的结果说明mil R7可能参与纤维素酶表达调控。此外,尽管目前通过基因工程技术、基因敲除技术以及DNA介导的丝状真菌转化系统等技术能够提高T.reesei产酶能力,但是对于T.reesei了解仍然十分缺乏。从基因层面了解T.reesei,能够更进一步发掘其卓越的生物功能方面的潜能,帮助提高纤维素酶的产量和效率。本工作的后半部分工作通过高通量测序手段,分别对T.reesei QM9414在抑制纤维素酶表达和诱导纤维素酶表达条件下转录情况进行分析,并通过比较两个不同条件下的转录情况,对显著差异基因进行聚类分析,最终得到了8个可能参与纤维素酶表达调控的基因。本工作通过构建过表达载体和Tu D序列验证得到的小分子RNA-mil R7,能够显著提高T.reesei纤维素酶酶活,通过高通量测序得到的转录信息以及8个可能参与纤维素酶表达调控的基因,为研究T.reesei的细胞生长代谢、表达调控提供可靠的依据,并为进一步提高T.reesei纤维素酶酶活提供新的方法和途径。