论文部分内容阅读
目的ATP5B基因编码ATP合成酶p亚单位,β亚单位的异常表达将影响ATP合成酶的功能。.越来越多的研究表明疾病与ATP合成酶的异常表达相关,而且在很多研究中ATP5B已以作为肿瘤治疗药物的靶点。到目前为止,宫颈癌中ATP5B的表达情况尚未报道,而且ATP5B的生物学功能也没有详细的研究。因此,本实验的目的是阐明ATP5B在宫颈癌中的表达水平,以及ATP5B对宫颈癌细胞的生物学功能及其影响机制。方法Real-time PCR确定ATP5B在6对宫颈癌及癌旁正常组织标本中的表达水平。构建可以沉默ATP5B的重组载体pRNAT-U6.2/ATP5B-shRNA,脂质体转染HeLa细胞后利用Western Blotting验证pRNAT-U6.2/ATP5B-shRNA对ATP5B的干扰效果。MTT,平板克隆形成和生长曲线,细胞划痕,1transwell,细胞聚集实验分别检测ATP5B的沉默对HeLa细胞活性、细胞生长能力、细胞运动、细胞侵袭和细胞黏附能力的影响。MTT检测ATP5B沉默后HeLa细胞对化疗药物紫杉醇的敏感性。通过流式细胞仪分析ATP5B的沉默对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果Real-time PCR分析结果表明,与癌旁正常组织相比,ATP5B在宫颈癌组织中高表达。ATP5B的shRNA表达载体pRNAT-U6.2/ATP5B-shRNA能够有效地沉默内源性ATP5B的表达,干扰效率达到70.1%。与对照组相比,ATP5B的沉默降低了HeLa细胞的活性,细胞的生长能力,以及细胞的运动能力和侵袭能力。然而ATP5B的沉默却增加了细胞的黏附性。此外,ATP5B的沉默还可以增加HeLa细胞对紫杉醇药物的敏感性。流式分析结果表明ATP5B的沉默促进了细胞凋亡,但是对细胞周期并无影响。结论宫颈癌组织中ATP5B是高表达的,在宫颈癌细胞中ATP5B的沉默可以降低细胞的活性,抑制细胞的生长,侵袭和运动能力,但是却可以增加细胞的黏附能力。同时ATP5B的沉默也可以增强细胞对化疗药物的敏感性。ATP5B的沉默引起的生长抑制是由于对细胞凋亡的促进,而不是对细胞周期的阻滞。本研究首次发现ATP5B对宫颈癌细胞的生物学功能发挥着重要的调节作用,这将为肿瘤诊断和治疗提供新的线索。