哺乳动物胚胎的冷冻保存在动物种质资源保存方面日益显示出强大的应用潜力。猪的胚胎冷冻保存对于良种资源的保存和世界范围内猪的品种改良非常重要,备受关注。自从1998年Vajta用OPS管成功冷冻猪桑椹胚和囊胚以来,玻璃化冷冻显示出了极大优势。本实验在研究了猪体外受精、胚胎培养条件后运用OPS管冷冻了猪的体外受精胚胎,比较了不同时期、不同冷冻保护剂和不同预处理方法冷冻早期体外受精胚胎的效果,旨在建立一套有效的猪体外受精胚的玻璃化冷冻保存技术。本实验的结果如下:1.以猪新鲜精液、冷冻猪新鲜精液进行猪的体外受精,以活力较低(＜0.5)且畸形率较高(＞30%)的新鲜精液进行体外受精后受精胚的卵裂率较活力(＞0.8)和形态(畸形率＜10%)都正常的鲜精组差异不显著(51%vs53.6%),但是受精后桑椹胚的发育率明显低于正常鲜精组(28.9%vs47.4%);以活力较高(＞0.5)的冻精进行体外受精后受精胚的卵裂率和桑椹胚的发育率与正常的鲜精组无明显差异(54.3%vs51.1%,48.2%vs45.4%);以活力(≤0.4)较低的冻精进行体外受精其受精胚的卵裂率较活力(＞0.5)高的冻精组无明显差异(56.4%vs54.3%),但是受精后桑椹胚的发育率明显低于活力高的冻精组(37.0%vs48.2%)。另外,用不同精-卵比例(分别为Group A:12000:1、GroupB:6000:1、Group C:3000:1)冻精进行体外受精,发现A组受精胚的卵裂率(37.5%)和桑椹胚的发育率(34.4%)都明显低于B、C组,后两组受精胚的卵裂率和桑椹胚的发育率无明显差异(54.3%vs 54.2%,48.5%vs 45.7%)。结果表明精液质量会影响体外受精胚的后续发育;无论是鲜精或是冻精,精子活力并不是影响体外受精卵裂率的决定因素;体外受精时合适的精卵比例提高了受精胚后续的发育能力。2.采用NCSU-23和PZM-3中培养后的卵裂率分别是54.7%、55.0%,差异不显著:前者获得了46.2%的桑椹胚发育率,比后者40.3%的桑椹胚发育率高,但两者差异不显著。单独采用NCSU-23培养猪体外受精胚卵裂率和桑椹胚的发育率分别是61.1%和47.2%,与输卵管上皮细胞单层共培养后卵裂卒和桑椹胚的发育率分别是63.4%和49.3%。共培养后的卵裂率和桑椹胚的发育率都稍高于单独用NCSU-23培养,但两者差异不显著3.采用EDS(15%乙二醇、15%二甲基亚砜、0.5M蔗糖)直接冷冻合子期受精胚获得了62.3%的存活率,显著高于2-8细胞、8-16细胞、桑椹胚组,后三组冷冻解冻后的胚胎存活率都很低,分别是8.7%、4.4%和5.6%。4.采用ES(40%乙二醇、0.5M蔗糖)直接冷冻冷冻合子期受精卵解冻后形态正常率和存活率分别只有53.3%和31%,明显低于EDS组(90%和72.7%),说明EDS冷冻保护效果好于ES。用细胞松弛素B处理合子期体外受精卵冷冻解冻后的形态正常率是60.6%,明显低于直接冷冻组(81.7%):CB处理合子期体外受精卵冷冻解冻后受精卵的存活率为61.2%,低于直接冷冻(70.2%),但是两者之间差异不显著。所有合子期受精卵冷冻组解冻后培养24h均未卵裂。