背景:随着人类饮食和生活方式的改变,糖尿病等代谢性疾病的患病率急剧增加,严重威胁着人类的身心健康。糖尿病所导致的微血管和大血管并发症是糖尿病发病率和死亡率居高的主要原因。研究发现血管内皮功能障碍是导致糖尿病血管病变的启动因素并与糖尿病血管并发症的发病机制密切相关。非诺贝特,是一种经典的降低甘油三酯的药物。近年来,大规模的临床试验发现非诺贝特能够减少糖尿病患者的血管并发症的发生,研究发现非诺贝特的这种糖尿病的血管保护作用可能是独立于本身的降脂作用,但是它的具体的作用机制目前还不完全清楚。目的:研究非诺贝特是否能够改善糖尿病小鼠的血管功能,以及研究非诺贝特对糖尿病小鼠血管功能保护的潜在作用机制。方法:1.本实验通过给C57BL/6小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ,50 mg/kg/d)连续五天,构建糖尿病小鼠模型,对照组注射等体积枸橼酸-枸橼酸钠溶液;通过给小鼠灌胃非诺贝特溶液(100mg/kg/d)连续八周,进行治疗。对照组给予灌胃等体积的羧甲基纤维素钠溶液。把小鼠随机分成四组小鼠,分别为对照组小鼠、非诺贝特处理的对照组、糖尿病小鼠、非诺贝特处理的糖尿病小鼠。2.分离四组小鼠的肾脏入球小动脉,采用显微微灌注技术,研究入球小动脉对乙酰胆碱的反应和张力变化,比较四组小鼠的血管功能的差异。3.分离四组小鼠的主动脉,采用多通道血管张力测定系统(DMT)检测主动脉血管张力,研究主动脉对乙酰胆碱等血管活性药物的反应和张力变化,比较四组小鼠的血管功能的差异。4.通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测四组小鼠血清尿素氮、肌酐、肾损伤因子-1、血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白,比较四组小鼠的肾功能指标的差异。5.通过一氧化氮水平检测试剂盒检测四组小鼠的主动脉和血清中总一氧化氮(NO)水平。6.通过试剂盒检测四组小鼠主动脉组织的超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和过氧化氢的水平,比较四组小鼠的氧化应激水平的差异。7.通过ELISA试剂盒检测四组小鼠血清的前列腺素E2和血栓素A2的水平。8.用含蛋白酶抑制剂的RIPA蛋白裂解液提取主动脉组织的蛋白质,采用BCA法进行蛋白浓度测定,Western blot技术检测四组小鼠主动脉的PPARα、p-LKB1/LKB1、p-AMPK/AMPK、p-e NOS/e NOS、NF-κB、COX-2等蛋白质的相对表达量。9.分离四组小鼠的主动脉,预孵育e NOS抑制剂、PPARα激动剂或抑制剂、AMPK激动剂或抑制剂、过氧化物歧化酶类似物、COX-2抑制剂等,采用多通道血管张力测定系统(DMT)检测主动脉血管张力,研究主动脉对乙酰胆碱和去甲肾上腺素等血管活性药物的反应和张力变化,比较小鼠预孵育药物前后以及不同小鼠组间的血管功能的差异。10.用含有正常浓度糖(11.5 mmol/L)和高浓度糖(44 mmol/L)的生理盐溶液孵育正常小鼠的主动脉,用或不用非诺贝特预孵育,然后采用多通道血管张力测定系统(DMT)检测主动脉血管张力,比较不同主动脉处理组间的血管功能的差异。结果:1.与对照组小鼠相比,糖尿病小鼠表现出血糖的明显升高和体重的显著下降。而使用非诺贝特治疗,对小鼠的血糖和体重没有明显影响。2.与对照组小鼠相比,糖尿病小鼠的主动脉血管表现为内皮依赖性舒张障碍和收缩增强。而使用非诺贝特治疗后,可以显著的逆转上述异常的血管张力改变。3.四组小鼠主动脉的非内皮依赖性舒张功能没有明显差异。4.与对照组小鼠相比,糖尿病小鼠的肾脏入球小动脉表现出明显的舒张功能障碍,而使用非诺贝特可以改善这种障碍。5.糖尿病小鼠的血清和主动脉中的NO水平都比对照组小鼠显著减少了,使用非诺贝特处理后阻止了这种改变。6.非诺贝特抑制了糖尿病状态下小鼠主动脉中的氧化应激水平的增加和肾功能的损伤。7.与对照组相比,糖尿病小鼠血清中的前列腺素类缩血管物质,即前列腺素E2和血栓素A2的水平显著上调了。而使用非诺贝特抑制了这种上调。8.与对照组相比,糖尿病小鼠主动脉组织的PPARα、p-AMPK、p-LKBI、p-e NOS蛋白水平下调了。使用非诺贝特处理逆转了上述现象。9.与对照组相比,糖尿病小鼠主动脉组织的NF-κB和COX-2水平增加了。使用非诺贝特处理抑制了上述现象。10.对非诺贝特处理的糖尿病小鼠的主动脉进行预孵育e NOS抑制剂或PPARα抑制剂或AMPK抑制剂,均可以逆转非诺贝特对血管舒张功能的保护作用。11.对安慰剂处理的糖尿病小鼠的主动脉进行预孵育PPARα激动剂或AMPK激动剂或超氧化物歧化酶类似物,都可以改善主动脉舒张功能。12.对安慰剂处理的糖尿病小鼠的主动脉进行预孵育COX-2抑制剂或超氧化物歧化酶类似物,都可以改善主动脉收缩功能。13.在体外高糖孵育正常小鼠的主动脉能够减弱血管的内皮依赖性舒张功能和增强血管的收缩功能,而使用非诺贝特预孵育可以改善这种血管张力障碍。结论:1.非诺贝特能够改善糖尿病小鼠的血管功能,主要是通过平衡糖尿病小鼠血管的舒张和收缩功能起到了血管的保护作用。2.非诺贝特通过PPARα/LKB1/AMPK/e NOS途径增加糖尿病小鼠血管的一氧化氮水平和抑制氧化应激来改善糖尿病小鼠的血管舒张功能障碍。3.非诺贝特通过NF-κB/COX途径减少糖尿病小鼠的前列腺素类的缩血管物质和抑制氧化应激来改善糖尿病小鼠的血管收缩功能异常