流动注射化学发光检测及应用研究

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化学发光(chemiluminescence, CL)具有灵敏度高、线性范围宽、仪器设备简单等优点,流动注射分析法(flow injection analysis, FI)是指在热力学非平衡条件下,在液流中重现处理试样或试剂区带的定量流动分析技术。将CL与FI相结合而形成的FI-CL分析法具有分析速度快、精度高、易于实现自动化等特点,其研究和应用越来越广泛。本论文利用FI-CL技术,对氨基酸等生化样品进行检测和机理研究,主要研究内容如下:1.基于碱性条件下,谷氨酰胺对luminol-H2O2-CuSO4体系CL信号有抑制作用,建立了一种简单、快速、灵敏测定谷氨酰胺的FI-CL的新方法。对各种影响CL信号强度和重现性的因素进行了系统优化。在优化条件下,相对CL强度与谷氨酰胺的浓度在5.0×10-7-2.5×10-6mol/L范围内呈现良好的线性关系,其检出限为1.8×10-8 mol/L。对1.5×10-6mol/L的谷氨酰胺标准溶液平行11次测定,相对标准偏差(RSD)为1.8%。将新方法成功应用于Marzulene-s颗粒中谷氨酰胺含量的测定,并在不同浓度水平进行加标回收实验,回收率在98.7%-108.6%之间,结果令人满意。结合荧光光谱和紫外吸收光谱对CL反应机理进行了研究。2.研究发现,在Na2CO3-NaHCO3介质中,谷氨酸等20种氨基酸对luminol-H2O2-CuSO4 CL体系均有抑制作用。采用FI精确控制试剂进样量,结合CL建立了一种高效快速,易于自动化操作的FI-CL检测20种氨基酸的新方法,检出限在4.5×10-7-4.3×10-10mol/L之间,峰高的RSD小于3.2%。将该方法分别应用于谷氨酸和精氨酸注射液的加标回收,结果令人满意。机理研究表明:由于氨基酸络合了Cu2+,致使luminol-H2O2-CuSO4体系的CL信号降低。3.根据肾上腺素对luminol-KIO4 CL信号有显著的增强作用,提出了一种快速、准确测定肾上腺素的新方法。对各种影响CL信号强度和重现性的因素进行了优化。在最佳实验条件下,肾上腺素的线性范围为5.0×10-8-1.5×10-6mol/L,检出限为1.9×10-9 mol/L。对3.0×10-7 mol/L的肾上腺素标准溶液平行测定13次,峰高的RSD为0.7%。完成一次样品分析仅需要27s,采样频率大约为130 samples/h。利用荧光光谱和紫外吸收光谱对该反应机理进行了研究。4.在碱性介质中,我们发现血红蛋白对luminol-hydrazine弱CL体系有显著的增强作用。结合FI研究了血红蛋白在luminol-hydrazine体系中的化学发光行为,优化了化学发光反应的条件。实验表明,线性范围为5.0×10-9-6.0×10-5g/mL;检出限是5.8×10-10g/mL;分别对5.0×10-7、7.0×10-6和4.0×10-5g/mL的血红蛋白标准溶液平行8次测定所得RSDs分别为1.6、0.7和1.5%。将该方法成功用于人血液和血清中血红蛋白含量的测定。本方法无需标记且具有操作简便、快速、易实现自动化操作等优点。
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