昆虫病原线虫共生细菌高毒力菌株的筛选及杀虫活性物质的研究

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为寻找新的杀虫毒素资源,开发新的杀虫毒素基因,本研究自九个昆虫病原线虫品系中分离共生菌菌株80株,用生物测定方法对共生菌菌株的杀虫活性进行评价,从中筛选高毒力菌株,研究其杀虫活性物质,初步开展了共生菌杀虫毒素的纯化工作,主要结论如下: 以玉米螟为供试昆虫,对80个菌株进行了胃毒毒力和体重抑制率的测定,从中筛选出A24-6R、A24-1B和A24-19B三个菌株为高毒力菌株,进一步进行杀虫活性物质研究。 在血腔毒力测定中,三个高毒力菌株在10cell/μl的菌液浓度下仅需10μl48h内就能使大蜡螟老熟幼虫在全部死亡。高毒力菌株中A24-1B为长杆形细菌,A24-6R为短杆形细菌。 在对三个高毒力菌株相关影响因子的研究中表明,三个高毒力菌株经高温50℃处理10min后,杀虫活性均有所降低,但对玉米螟幼虫仍有较高的体重抑制率;经高温100℃处理10min后,三菌株均丧失了杀虫活性,对玉米螟幼虫体重抑制率较低;三个高毒力菌株在18W紫外灯照射下,随着照射时间的延长,对玉米螟的杀虫死亡率和校正死亡率都呈逐渐下降的趋势,在紫外照射120min时,完全丧失杀虫活性。通过对三个高毒力菌株生长曲线的测定,可知Ⅱ型菌A24-6R比Ⅰ型菌A24-1B和A24-19B的繁殖速度快。 以A24-19B为供试菌株,研究不同培养时间对高毒力菌株杀虫活性的影响,结果表明A24-19B菌株发酵液对玉米螟的杀虫校正死亡率和体重抑制率随着培养时间的延长呈波浪形升高趋势。A24-19B的发酵液对玉米螟初孵幼虫的LC50为7.46×109 cell/ml。 测定了三个高毒力菌株对小菜蛾(Plutella xylostella)、甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)、粘虫(Mythimna separata)、黄粉虫(Tenebrio molitor)幼虫的胃毒毒力,结果表明,除黄粉虫外,对其余三种供试鳞翅目昆虫幼虫均表现较高的胃毒毒力,具有较广泛的杀虫谱。 提取了三个共生菌高毒力菌株的杀虫活性物质,并初步进行了纯化,得到杀虫毒素粗提物,在提纯过程中,杀虫活性没有降低。
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