鹿茸多肽联合GDNF基因修饰的雪旺细胞对辐射诱导脊髓神经元细胞凋亡的影响

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目的:观测鹿茸多肽联合GDNF基因修饰的雪旺细胞对于辐射诱导脊髓神经元细胞凋亡后脊髓神经元细胞Bax蛋白与1的表达以及凋亡率的影响。  方法:制取胎鼠脊髓神经元细胞悬液,取处于对数生长期的脊髓神经元细胞,用辐射诱导凋亡,将培养细胞总共分为六组。A组:正常的脊髓神经元细胞组;B组:经辐射诱导凋亡后的脊髓神经元细胞培养组;C组:经辐射诱导凋亡后的脊髓神经元细胞+SCs组;D组:经辐射诱导凋亡后的脊髓神经元细胞加pEGFP-N1转染SCs组;E组:经辐射诱导凋亡后的脊髓神经元细胞联合pEGFP-N1/GDNF转染SCs组;F组:鹿茸多肽联合pEGFP-N1/GDNF转染SCs加经辐射诱导凋亡后的脊髓神经元细胞加组。将各分组细胞通过流式细胞仪采取细胞凋亡率检测,使用免疫组化方法对脊髓神经元细胞的Bcl-2蛋白和Bax蛋白的表达情况进行观测。  结果:各分组细胞的凋亡率检测结果如下:相比于正常的脊髓神经元细胞组,经辐射诱导凋亡后的脊髓神经元细胞培养组细胞凋亡百分数明显增高(p<0.05);与经辐射诱导凋亡后的脊髓神经元细胞培养组组比较,经辐射诱导凋亡后的脊髓神经元细胞+SCs组、经辐射诱导凋亡后的脊髓神经元细胞加pEGFP-N1转染SCs组、经辐射诱导凋亡后的脊髓神经元细胞联合pEGFP-N1/GDNF转染SCs组、鹿茸多肽联合经辐射诱导凋亡后的脊髓神经元细胞加pEGFP-N1/GDNF转染SCs组四组细胞凋亡百分数降低(p<0.05);与经辐射诱导凋亡后的脊髓神经元细胞+SCs组比较,辐射后的脊髓神经元细胞加pEGFP-N1转染SCs组、鹿茸多肽联合经辐射诱导凋亡后的脊髓神经元细胞加pEGFP-N1/GDNF转染SCs组两组细胞凋亡百分数明显下降(p<0.05)。  免疫组化检测显示, Bcl-2阳性细胞胞质着棕色。结果显示,A、B、C、D、E、F、组均有Bcl-2的表达,并且A组的Bcl-2阳性细胞数目最低,细胞着色较淡,F组Bcl-2阳性细胞数目最高,细胞着色较深,并F组颜色与C、D、E三组有明显的差异,C、D、E三组的阳性细胞数差别不太大,细胞着色差异不大。可见鹿茸多肽联合经辐射诱导凋亡后的脊髓神经元细胞加pEGFP-N1/GDNF转染SCs加经辐射诱导凋亡后的脊髓神经元细胞组使Bcl-2表达上调,从而抑制脊髓神经元的凋亡。A、B、C、D、E、F组均有Bax的表达,并且A组Bax阳性细胞数目最低,细胞着色较淡,B组Bax阳性细胞数目最高,细胞着色较深。F组Bax与C组、D组、E组相比,F组的阳性细胞数少很多,细胞着色差异明显,C组、D组、E组三组的Bax阳性细胞数相差不大,细胞着色差异不大,但与B组比较明显减少。可见鹿茸多肽联合经辐射诱导凋亡后的脊髓神经元细胞加pEGFP-N1/GDNF转染SCs组使Bax表达下调,从而抑制脊髓神经元的凋亡。  结论:流式细胞仪结果显示,经辐射诱导凋亡后的脊髓神经元细胞联合鹿茸多肽组与经辐射诱导凋亡后的脊髓神经元细胞加pEGFP-N1转染SCs组细胞凋亡率都低于经辐射诱导凋亡的脊髓神经元细胞培养组,鹿茸多肽联合经辐射诱导凋亡的脊髓神经元细胞加pEGFP-N1/GDNF转染SCs组细胞凋亡率明显低于经经辐射诱导凋亡的脊髓神经元细胞加pEGFP-N1转染SCs组但高于正常脊髓神经元组,据此推断,鹿茸多肽联合GDNF修饰的雪旺细胞相比单独使用鹿茸多肽或单独使用GDNF修饰的雪旺细胞治疗脊髓损伤可能具有更好的优势。
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