转WAM1拟南芥对小菜蛾生长发育及肠道菌群的影响

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:supengfei789
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小菜蛾肠道菌群在其生长发育过程中扮演者重要的角色。本研究通过将来自于尤金袋鼠(Macropus eugenii)的抗菌肽基因WAM1导入拟南芥中,研究其对小菜蛾生长发育及其肠道菌群的影响,取得如下成果:  通过人工合成WAM1基因,并优化其密码子为拟南芥偏爱的,将其与植物表达载体pSR784d连接,构建重组植物表达载体WAM1-pSR784d,并遗传转化根癌农杆菌LBA4404。通过花絮侵染法遗传转化拟南芥,经过除草剂Basta初步筛选获得6株表现型为阳性的植株。  PCR检测,6个株系中均可检测出WAM1基因条带,初步确定为转基因阳性植株,分别命名为WAM1-A、B、C、D、E、F;RT-PCR检测,WAM1基因在6个拟南芥株系中均表达,其中WAM1-C表达量最高,并且极显著高于其他株系。  生测实验表明,取食WAM1-C的小菜蛾的第四龄期极显著长于取食其他株系的小菜蛾,在蛹期和成虫期各处理之间无显著差异;取食转WAM1拟南芥的小菜蛾均降低重,其中取食WAM1-C的小菜蛾达到极显著水平,蛹重无显著差异。通过对小菜蛾肠道菌群的16S rDNA测序表明,小菜蛾肠道菌群优势菌为厚壁菌门和变形菌门,取食野生型拟南芥与转入空载pSR784d其肠道菌群结构在门和科级水平均类似,说明未携带目的基因的T-DNA片段不对小菜蛾肠道菌群产生影响,取食WAM1-C的小菜蛾的肠道菌群在门的分类水平上差异较小,但在科的分类水平上差异较大,其中肠杆菌科的丰度由48.67%降到38.93%,黄单胞菌科的丰度由9.38%降到0.89%,但莫拉菌科的丰度由2.28%增加到25.87%;芽孢杆菌科的丰度由5.32%增加到19.44%,肠球菌科的丰度由17.67%降到3.78%。此外,低丰度的假单胞杆菌由0.56%上升到2.53%。  结果表明,转WAM1拟南芥可以通过改变小菜蛾幼虫的肠道菌群结构,进而影响小菜蛾幼虫期的发育时间。
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