论文部分内容阅读
帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一种常见于中老年人的进行性神经系统变性疾病。黑质内多巴胺能神经元变性、丧失，多巴胺(dopamine，DA)分泌减少，纹状体内乙酰胆碱-多巴胺(Ach-DA)两种递质失去平衡，是导致PD临床症状的机制，但其确切病因至今不明。在基底节区，γ-氨基丁酸(gamma-amin-butyric acid，GABA)能神经系统、谷氨酸(glutamic acid，Glu)能神经系统以及DA能神经系统在解剖和生理功能上都有着密切的关系。研究已经证明，Glu含量异常增高可以诱导兴奋毒性作用，导致黑质内的DA能神经元进行性变性、凋亡，参与了PD的发病。研究PD发病后基底神经节亚区GABA的含量、GABA能神经元以及GABA受体mRNA表达的变化，对进一步阐明PD的发病机制以及寻找PD的发病原因具有重要的理论意义。 本文应用6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine，6-OHDA)脑内立体定位注射制成偏侧PD动物模型，采用高效液相色谱分析(high performance liquid chromatogrophy，HPLC)仪测定了损毁侧与未损毁侧黑质网状部(substantia nigra pars reticulars，SNr)、新纹状体(caudoputamen，CPu)和丘脑底核(subthalamic第二军医大学硕士学位论文中文摘要nucles，S翎)氨基酸递质的含量;应用免疫组织化学(i~histochemistry，IHC)和图像分析技术(image analysis teehnigue，IAT)，观察偏侧PD大鼠模型基底神经节亚区GABA能神经元的形态和数量变化;采用Northem ELISA法测定偏侧帕金森大鼠SNr、CPu和SIN内的GABAA受体Q，、a:、pZ、丫:亚单位mRNA的表达，主要结果如下: 1、PD大鼠损毁侧SNr、CPu和SIN组织内氨基酸递质含量与未损毁侧相同解剖部位相比，Glu、AsP、Gly、GABA含量增加，差异均有显著性意义(P<0.01)。理论上讲，Glu含量的增高将引起GABA含量增加，而GABA含量增加会反过来抑制Glu释放，使Glu含量下降;而Glu含量下降会使GABA含量下降，使二者的水平逐渐恢复到接近正常，但我们没有观察到此现象。 2、Vehicle组大鼠损毁侧基底神经节亚区SNr、SIN区均存在着大量中等大小、椭圆形的GABA阳性神经元，也有少数的多角形细胞存在;CPu区可见大量体积较小且分布均匀的GABA阳性神经元，胞体呈圆形或椭圆形，胞核相对较大，胞质较少。与假手术组比较，实验组大鼠损毁侧SNr、STN和CPu的GABA阳性神经元数量均明显减少(P<0.05);而Ket田爪ine治疗组与vehicle组比较无明显差别(P>0.05)。 3、在偏侧PD大鼠SNr:损毁侧GABA^受体Ql亚单位与未损毁侧比较其mRNA表达水平显著下降(P<0.01)，损毁侧GABAA受体。2亚单位与未损毁侧比较其mRNA表达水平显著下降(P<0.05)，损毁侧GABAA受体p:、Y:亚单位与未损毁侧比较其功RNA表达水平无明显差别(P>0.05)。在偏侧PD大鼠CPu:损毁侧GABAA受体al、Q:亚单位与未损毁侧比较其mRNA表达水平显著下降(P<0.01);损毁侧GABAA受体p:、丫:亚单位与未损毁侧比较其m丑NA表达水平无明显差别。在偏侧 PD大鼠STN:损毁侧GABAA受体Q，、Y:亚单位与未损毁侧比较其mRNA表达水平显著下降(P<0.01);损毁侧GABAA受体。2、pZ亚单位与未损毁侧比较其mRNA表达水平无明显差别(P>0.05)。 4、三部分的结果结合起来显示，虽然在偏侧PD大鼠损毁侧GABA含量在发病后明显增加，但是由于GABA能神经元的数目明显减少、GABA^受体的部分亚单位mRNA表达水平的下降，导致GABA能神经元系统的功能下降，所以没有能够抑制Glu的过度释放，使得Glu诱导的兴奋性毒性长期存在。因而第二军医大学硕士学位论文中文摘要PD表现为黑质内DA能神经元进行性地变性、丢失。据此我们认为，GABA能神经系统通过GABA能神经元的减少以及GABAA受体亚单位mRNA表达水平的下降，参与了Gfu诱导的兴奋性毒性，可能是导致PD发病的原因之一。