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本实验的目的是选择适合修饰人红细胞Rh血型的甲氧基聚乙二醇衍生物,将RhD(+)血型改造为RhD(-)血型,为解决临床上RhD(-)血源严重缺乏打下基础。 实验比较了四种不同端基的甲氧基聚乙二醇(mPEG)对RhD(+)血型抗原的修饰效果;观察了mPEG修饰对红细胞结构功能及形态的影响;建立了双水相分离系统将修饰与未修饰的红细胞分开并判定修饰的比例;观察了修饰后红细胞4℃下保存期;分析了mPEG与红细胞膜的结合稳定性;并使用mPEG修饰小鼠红细胞,进行小动物输血实验,观察了mPEG修饰对红细胞在受试动物体内寿命的影响。 实验结果表明在四种mPEG中,以mPEG-BTC的修饰效果最好,在温和、接近于生理的条件下可以将RhD(+)抗原充分遮蔽,表现出RhD(-)红细胞的性质;mPEG修饰没有影响红细胞的结构功能,包括渗透脆性、自身溶血、乙酰胆碱酯酶活性、膜胆固醇含量、ATP、2,3-DPG、红细胞变形性以及红细胞形态等;mPEG修饰红细胞的比例可达80%以上;修饰后红细胞4℃下可保存21天;保存期内mPEG与红细胞膜稳定结合;小鼠的体内实验证明修饰不会减短红细胞在受试动物体内的寿命。 本实验还收集到临床疑难配血病例6例,用谱细胞筛查方法确认他们均含有RhD抗体,病例来自新生儿溶血病产妇及肿瘤和肝硬化患者,这些病例均难以找到合适的供体红细胞。采用mPEG-BTC修饰后的红细胞可与患者血清相配,聚凝胺及抗人球蛋白法检测结果说明修饰后红细胞与疑难血清不出现凝集现象,为解决输血中含RhD抗体患者的疑难配血和输血问题打下基础。