目的：顽固性癌症疼痛非常剧烈，完善的镇痛对于改善癌痛患者的生活质量十分重要，实验证实应用患者自控镇痛泵泵注吗啡复合氯胺酮对于很多顽固性癌痛患者的镇痛都是安全有效的。应用患者自控镇痛泵泵注镇痛药可以保证血清药物浓度始终在有效水平，镇痛效果也会连续而稳定。在阿片类药物中，中重度癌痛的首选是吗啡，吗啡也是其他阿片类药物的衡量标准。而对于少数患者，要得到足够的镇痛和较少的副作用则需要依赖其他阿片类药物或其他辅助镇痛药物、椎管内镇痛或者非药物方法来控制疼痛。而氯胺酮通过NMDA拮抗作用，潜在的减轻阿片类药物耐受以及痛觉过敏，可以与吗啡很好的配合伍用。　　但是顽固性癌痛本身以及治疗药物如吗啡和氯胺酮都曾被报道会对病人产生一系列的免疫影响作用。顽固性癌痛患者长期剧烈的疼痛会造成很强的免疫抑制，而且这种免疫抑制会进一步加剧癌症患者本身由于肿瘤进展和放化疗引起的免疫低下状态。长期应用吗啡也会影响先天的和后天的免疫。氯胺酮是目前免疫抑制最小的全身麻醉药之一，阈下剂量的氯胺酮对机体的免疫功能影响很小或可以忽略，临床上一般使用阈下剂量以避免过多地影响免疫功能。而吗啡复合小剂量氯胺酮对顽固性癌痛患者免疫的影响则报道很少，本课题即在体外研究吗啡复合小剂量氯胺酮对于顽固性癌痛患者T细胞的影响及可能的机制。　　方法：选取接受过WHO推荐的三阶梯口服镇痛药治疗但效果不佳的恶性肿瘤患者，排除以下病例:合并感染者、一个月内死亡或改变治疗方案者、恶液质患者、广泛的远处器官转移者、以及严重心肺和肝功能受损者。最终共选取合适的病例46例，签署知情同意书。　　利用聚蔗糖-泛影葡胺法从顽固性癌痛患者外周血中提取分离外周血单核细胞，并进行计数以及活力测定。利用正向选择的抗CD3磁珠分离T细胞，荧光标记证实纯度为85％。然后用RPMI1640培养基将T细胞于96孔板中调整为1×105/ml的最终浓度，置于37℃、5％CO2的孵育箱中孵育。然后将T细胞分为三组，分别加入生理盐水（空白对照组）、吗啡200ng/ml（吗啡组）、吗啡200ng/ml复合氯胺酮100ng/ml（吗啡复合氯胺酮组），作用24小时后用抗CD3和抗CD28(5ug/ml)刺激，刺激时间为24小时。　　利用流式细胞三色免疫荧光抗体直接标记法检测分析CD4+CD3+T细胞、CD8+CD3+T细胞的数量以及两者分别占CD3+T细胞的比值，并计算CD4+CD3+T细胞与CD8+CD3+T细胞的比值，以确定T细胞数量以及亚群比例的变化;应用酶联免疫吸附测定法测定上清IL-2和IFN-γ免疫反应性蛋白浓度，以确定T细胞分泌部分细胞因子功能的变化;实时定量PCR分析IL-2mRNA和IFN-γmRNA含量以确定细胞因子IL-2和IFN-γ在转录水平的变化;Western免疫印迹法分析活化核因子κB(NF-κB)活化p65蛋白，以确定是否由于DNA蛋白的变化引起IL-2mRNA和IFN-γmRNA的变化。　　统计分析采用SPSS17.0软件，计量资料以均数±标准差(M±SD)表示，采用重复测量资料的方差分析(ANOVA)，计数资料比较采用x2检验;p＜0.05为差异有统计学意义，p＜0.01为有明显差异。　　结果：在流式细胞检测分析CD3+T细胞亚群的实验中，吗啡组、吗啡复合氯胺酮组的CD4+和CD8+T细胞的数量、CD4+和CD8+T细胞占CD3+T细胞的百分比、CD4+/CD8+比值，均比空白对照组降低（P＜0.05）;而吗啡复合氯胺酮组的CD4+和CD8+T细胞的数量、CD4+和CD8+T细胞占CD3+T细胞的百分比、CD4+/CD8+比值，与吗啡组比较则没有统计学差异。　　在酶联免疫法测定上清IL-2和IFN-γ浓度的实验中，吗啡组、吗啡氯胺酮组的上清IL-2和IFN-γ浓度与空白对照组对比没有统计学差异;吗啡复合氯胺酮组的上清IL-2和IFN-γ浓度与吗啡组对比也没有统计学差异。　　在实时定量IL-2mRNA和IFN-γmRNA的PCR测定实验中，吗啡组、吗啡复合氯胺酮组的IL-2mRNA和IFN-γ与内参β-act的比值与空白对照组相比均降低（P＜0.05）;而吗啡氯胺酮组与吗啡组对比则没有统计学差异。　　在Western免疫印迹法测定活化p65NF-κB实验中，吗啡组、吗啡复合氯胺酮组的活化p65与内参β-act的比值比空白对照组均降低(P＜0.05);而吗啡氯胺酮组与吗啡组对比则没有统计学差异。　　结论：本课题在离体的情况下，观察了吗啡与小剂量氯胺酮作用于顽固性癌痛患者外周血T淋巴细胞，利用流式细胞、ELISA、PCR、Western等实验技术观察该过程中T细胞亚群、分泌的细胞因子IL-2和IFN-γ及其mRNA、核转录因子NF-κB的变化，证实了以下结论:　　1.在体外试验中，吗啡、吗啡复合氯胺酮均会抑制顽固性癌痛患者活化后的T细胞的部分免疫功能;　　2.在体外试验中，吗啡复合氯胺酮对活化后的T细胞免疫功能的抑制程度与单纯吗啡的抑制程度相当;　　3.核转录因子NF-κB可能在吗啡以及吗啡复合氯胺酮抑制T细胞免疫功能的过程中发挥了作用。　　因此，本实验为吗啡复合小剂量氯胺酮治疗顽固性癌痛患者对其外周血T淋巴细胞的影响进行了初步的观察，为该方法的应用提供了实验依据，但对于更多免疫细胞以及体内水平的长期影响则需要更多的深入研究。