激素调节拟南芥花序发育的分子机理研究

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:Longee
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植物生殖器官的发育是植物生活周期中的关键环节。包括激素在内的多种信号调控了生殖器官的发育。为了解激素调节花序发育的分子机理,本研究以WS生态型野生型拟南芥的花序轴为外植体,通过调节激素的种类和浓度成功诱导了拟南芥离体花序的再生,并建立了两个不同的离体花序再生系统。系统Ⅰ中,以WS型拟南芥主花序轴上邻近第一个花芽的上下两个节间为外植体诱导愈伤组织形成,然后将愈伤组织转至分化培养基上诱导花序分化。系统Ⅱ中,选择与系统Ⅰ中相同的外植体,使之在一种培养基上完成愈伤组织诱导及花序分化两个过程。利用RT-PCR方法分析了TFL1和TFL2两个基因在离体花序分化过程中的表达情况,发现TFL1基因在花序原基形成后诱导表达,而TFL2基因则表现组成型表达模式。将TFL1基因的启动子与GUS报告基因构建融合表达载体,利用农杆菌介导法侵染WS型拟南芥植株,对获得的转基因植株进行组织培养和GUS染色分析。发现在系统Ⅰ和系统Ⅱ中,在分化中的愈伤组织中检测到GUS基因的表达,且其表达量随愈伤组织在分化培养基上培养时间的延长而增加。在再生的转基因花序中同样检测到GUS基因的表达,其表达模式与TFL1基因在野生型拟南芥植株中的表达模式一致。证明两个离体花序再生系统的可靠性。进一步的分析发现在TFL1基因的启动子序列中含有三个生长素响应元件,以前的研究表明这些元件可以特异性的与生长素响应因子结合从而影响基因自身的表达,因此推测生长素通过调节TFL1基因的表达,进而在拟南芥离体花序发育过程中发挥重要作用。构建了AtIPT4-pER8和CKX1-pER8两个诱导型表达载体,转化WS型拟南芥植株,对获得的转基因植株进行添加诱导剂后的组织培养和分析,发现来自AtIPT4-pER8转基因植株的外植体在分化培养基上的愈伤组织形成率显著低于对照,外植体大部分死亡,花序诱导频率显著降低;而来自CKX1-pER8转基因植株的外植体均能形成愈伤组织,但愈伤组织再分化频率则显著低于对照。研究结果表明细胞分裂素和生长素可能通过TFL1基因的表达诱导了花序的产生。
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