禾谷缢管蚜翅型分化相关基因的cDNA克隆及分析

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有关蚜虫翅型分化问题的研究从六十年代开始至今主要集中在外部环境因素和虫体内部的激素调节两个方面,多年研究发现在不同的环境条件下,基因在表达方面存在明显差异,因此要想彻底探明决定翅型分化的关键所在,利用现代分子生物学手段寻找相同基因型的有翅蚜和无翅蚜的差异表达基因具有重要意义。 本文运用抑制消减杂交(SSH)的方法比较研究了禾谷缢管蚜相同基因型的有翅蚜与无翅蚜在翅型分化表型明显的龄期(3龄若蚜)基因转录水平上的差异,找出了200个差异表达的cDNA片段,经过反向Northern的验证筛选到11个在有翅蚜中特异性表达的克隆。经过测序及序列比较结果显示,其中GJ18基因片段与一种蚜虫共生菌Buchnera aphidicola有98%的同源性、GD4基因片段与Rho家族中的cdc42基因序列有83%的同源性,其余9克隆为新基因片断。再通过5’-RACE方法结合RT-PCR技术克隆GD4全长cDNA序列,GD4的基因序列全长986bp,基因的读码框为576bp,编码191个氨基酸。利用NCBI、TIGR等公共数据库核苷酸进行同源性比较,其序列与非洲爪蟾Xenopus laevis的cdc42有76.74%的同源性,与果蝇Drosophila melanogaster的同源性有70.05%。GeneBank数据库查询结果表明,其氨基酸顺序与果蝇编码cdc42的氨基酸同源性达93.19%。cdc42属于小G蛋白的Rho家族,具有GTP酶活性,在调节细胞骨架、细胞运动、细胞增殖、凋亡、转化等细胞的信号转导中起重要作用。另外众多研究表明蚜虫的共生菌为蚜虫的生长、发育、分化等提供必要的氨基酸,因此推断通过SSH技术筛选出的GD4和GJ18基因可能为调控禾谷缢管蚜翅型分化的相关基因,其它九个未知基因的功能有待进一步的研究。
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