第一部分 Survivin等8种生物标记物在三阴性乳腺癌中的表达[实验目的]探究49名三阴性乳腺癌患者肿瘤组织中AR、CD8、FOXC1、DCLK-1、PD-L1、MAGE-A4、Survivin及WT1等8种生物标志物的表达情况以及与临床病理特征之间的关系。[实验方法]回顾性收集从2019年4月至2020年12月在南京鼓楼医院明确诊断为原发性三阴性乳腺癌的石蜡包埋组织标本49例。应用免疫组织化学法检测肿瘤组织中AR、PD-L1、CD8、FOXC1、DCLK-1、MAGE-A4、Survivin 及 WT1 等 8 种生物标志物蛋白的表达。并分析Survivin等8种生物标志物的表达和临床病理特征之间的相关性。[实验结果]1.肿瘤细胞中各生物标记物的阳性表达率:AR为40.82%（20/49）、FOXC1为81.63%（40/49）、Survivn为79.60%（39/49）、DCLK-1为71.42%（35/49）、MAGE-A4为20.41%（10/49）、CD8为34.70%（17/49）、WT1为24.49%（12/49）。FOXC1阳性表达率最高,与不表达者之间相比无统计学意义（P>0.05）,肿瘤细胞和肿瘤间质免疫细胞的PD-L1阳性率分别为24.49%（12/49）和49.00%（24/49）。2.各生物标记物的表达与临床病理特征之间相关性的分析结果:肿瘤间质免疫细胞的PD-L1表达与肿瘤组织学分级有统计学意义（P=0.012）,AR的表达与乳腺癌发生部位有统计学意义（P=0.014）;肿瘤细胞的PD-L1与AR的表达呈正相关（r=0.427,P=0.001）;此外,CD8与WT1的表达（r=0.272,P=0.049）、Survivin与DCLK-1的表达（r=0.326,P=0.017）及Survivin与MAGE-A4（r=0.448,P=0.001）均应呈正相关。肿瘤细胞的PD-L1与MAGE-A4的表达（r=-0.338,P=0.013）及PD-L1与DCLK-1的表达（r=-0.790,P=0.000）呈显著负相关,肿瘤间质免疫细胞PD-L1与WT1的表达（r=-0.628,P=0.000）同样呈显著性负相关;AR与Survivin的表达（r=-0.566,P=0.000）也呈显著性负相关。[实验结论]Survivin、PD-L1、CD8、FOXC1、DCLK-1、MAGE-A4及WT1等8种生物标记物在三阴性乳腺癌肿瘤组织种呈现不同程度的表达,并且较WT1等标记物相比,PD-L1、AR级DCLK-1可能与三阴性乳腺癌的发生、发展关系更为密切。值得进一步去探索其在三阴性乳腺癌种的价值。第二部分胡桃醌对三阴性乳腺癌细胞株体外抑制作用的研究及对Surivin等生物标记物表达的影响[实验目的]探究胡桃醌（Juglone,Jug）对三阴性乳腺癌细胞株增殖和生物标记物的影响。[实验方法]采用 CCK-8（Cell Counting Kit-8）法检测 Jug 与 DDP 对 MDA-MB-23 1、MDA-MB-468三阴性乳腺癌细胞的生长抑制率并计算IC50值。DAPI及PI染色倒置荧光显微镜观察细胞凋亡情况。流式细胞仪检测Jug对三阴性乳腺癌细胞的周期及凋亡影响。免疫组化化学染色法检测Jug对三阴性乳腺癌细胞Surivin等生物标记物表达的影响。[实验结果]1.Jug对MDA-MB-231、MDA-MB-468三阴性乳腺癌细胞存在明显抑制增殖作用,其抑制作用呈现显著时间及浓度依赖性。24hIC50值Jug作用组分别为:3.44μg/mL、3.59μg/mL;48hIC50值Jug作用组为:2.85μg/mL、2.91μg/mLL。2.Jug可以通过影响周期将MDA-MB-231、MDA-MB-468三阴性乳腺癌细胞周期阻滞于G0/G1期。3.细胞爬片免疫组化结果显示Jug处理MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞24h后,两者变化趋势基本一致,两株细胞的CD8及WT1免疫组化染色结果与用Jug处理前后结果相一致,都为阴性;Survivin结果由Jug处理后均由原本的阴性转化为阳性;两株细胞的AR染色结果由Jug处理后分别由原本的中度阳性变为弱阳性,和由弱阳性转化为阴性;DCLK-1的结果由未处理的阳性转为弱阳性或阴性;MAGE-A4染色结果分别为由阴性变为阳性表达,和一致阴性表达。[实验结论]Jug对三阴性乳腺癌MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞株存在明显抗肿瘤作用,对生物标记物包括AR、FOXC1、DCLK-1、MAGE-A4、Survivin及WT1有一定调控作用,或许这些生物标记物可以作为Jug治疗TNBC的预后因素,或者未来可以开发与Jug联合的生物制剂。