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多发性骨髓瘤是最常见的恶性浆细胞病,由于骨髓瘤细胞的高侵袭性、转移性和耐药性,故所有患者最终都将复发或耐药。目前还没有一种有效的方法将其治愈,攻克骨髓瘤是我们不可懈怠的使命。免疫治疗的发展给骨髓瘤的治愈提供了新方向,对于该疾病,首选的治疗手段仍为干细胞移植术,但该方法不仅容易复发,还易发生移植物抗宿主反应,带来极高的发病率和死亡率。骨髓瘤的免疫治疗目前存在的主要问题是:1)骨髓瘤细胞表面缺乏特异性表达的靶标分子;2)患者骨髓的局部微环境易产生免疫抑制和免疫逃脱并且容易产生免疫耐受。CAR-T细胞免疫疗法的出现给骨髓瘤的治疗带来了新的希望。CAR分子具有同时特异性定位到靶标分子和活化T细胞的功能,并且通过与信号域的结合实现T细胞持续的激活。靶向CD19的CART细胞临床试验表现出惊人和持久的结果,随着CART疗法在治疗血液病的成功,人们开始将目光转向其他领域,关于骨髓瘤目前有三个临床试验正在进行,其中有两个靶向BCMA和一个靶向CD138分子。本研究选取在骨髓瘤细胞表面高表达的CD138,BCMA,CD38,CD40分子和B细胞恶性肿瘤表面特异性表达的CD19分子为研究的靶标,通过freepatent online网站查找各研究靶标单抗序列的scFv段,获取其序列。电泳鉴定完后片段与用EcoRI和XbaI酶切好的工具质粒进行重组,电泳结果显示scFv片段、工具质粒、重组质粒的条带位置符合预期结果。重组质粒DNA测序的结果对该结果进一步确认。各靶标重组质粒转染293T细胞24小时,感染293T细胞48小时后均得到了很好的结果,通过对各靶标慢病毒的浓缩与纯化,得到了平均滴度达到10^9 IU/ml的慢病毒。K562稳定细胞株的抗原表达量均高于96%,CAR分子转导T细胞,BCMA-CAR的转导效率达64%,LDH法的杀伤实验结果表明,各CART细胞杀伤效果明显,最高达65%;我们成功的将杀伤实验结果与IFN-γ、IL-2和TNF细胞因子释放量建立相关性,本研究可为CAR-T细胞在应用到临床时方案的选择、细胞剂量的确定和临床治疗效果的预测提供重要依据。