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目的:丙戊酸（Valproic acid,VPA）是一种广谱抗癫痫药物,用于癫痫发作的单药治疗和辅助治疗。VPA在监测其血药浓度水平时,毒性作用不常见,但高于治疗水平时可引起毒性作用,其中肝毒性为严重的不良反应之一,与肝脏内脂质的蓄积相关。长期使用VPA会导致甘油三酯（triglyceride,TG）在肝脏的积聚,最终引起肝脂肪变性,研究表明长期使用VPA治疗也与非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）发展的风险增加有关。研究认为NAFLD是肝毒性的主要临床表现之一,并且VPA通过影响脂质代谢和转运相关的蛋白活性而导致肝内脂质代谢的紊乱,尤其是长链脂肪酸如甘油三酯,且VPA肝毒性与体内TG的水平呈正相关。微小RNA（micro RNA,miRNA）是一类内源性非编码小分子RNA,具有高度的保守性、时序性和组织特异性。研究表明,miRNAs作为发现和诊断疾病的生物标志物,特别是全血或特定血液成分中的miRNAs是改善疾病诊断的候选标志物。大量研究表明miRNAs分子可参与脂质代谢及相关疾病发生、发展的过程。如miR122、miR33a、miR199a等通过靶向结合于脂代谢相关靶基因,抑制其表达从而参与调控脂代谢过程。miRNAs分子也可通过调控相应的细胞因子或药物代谢酶的表达水平,从而减轻或增加药物引起的肝毒性。目前尚未有关于miRNAs参与VPA肝毒性的报道,因此,本研究从已有的文献报道中获得可能参与VPA肝毒性脂代谢相关的miRNAs,从VPA致肝功异常的癫痫患儿血清及VPA肝毒性细胞模型中对筛选出的miRNAs进行测定,筛选出差异表达的miRNAs;在VPA肝毒性细胞模型上过表达和抑制相关脂代谢miRNAs,探究其对脂质累积的影响;并初步探究miRNAs下游基因在VPA致肝脂毒性中的影响。方法:1.miRNAs筛选:从已有的文献报道中获得参与药物肝损伤或参与肝脂代谢相关的miRNAs。2.miRNAs测定与验证:收集服用VPA的癫痫患儿血清,分为肝功正常组（对照组）和肝功异常组。采用实时荧光定量PCR（q RT-PCR）方法测定各脂代谢相关miRNAs在两组患儿血清中的水平,筛选差异表达的miRNAs。采用1m M和5m M VPA处理的Hep G2细胞,建立VPA致肝毒性细胞模型,采用q RT-PCR方法测定各脂代谢相关miRNAs在细胞中的水平,筛选差异表达的miRNAs。3.miRNAs在VPA致肝毒性的作用机制的初步研究:通过靶点预测网站（Target Scan）预测脂代谢相关靶点,并通过荧光素酶报告基因进行验证。通过过表达（转染miRNA mimic）和抑制（转染miRNA inhibitor）miR-199a-5p,使用q RT-PCR方法和Western blot技术检测靶基因ABCA1表达量,并通过TG测定和油红O染色检测miR-199a-5p干预VPA致肝细胞脂质累积的影响。结果:1.通过q RT-PCR方法对采用VPA治疗的癫痫患儿血清中测定9种miRNAs。比较两组癫痫患儿血清中miRNAs表达差异,筛选出8种差异表达的miRNAs:miR-27a-3p、miR-27b-3p、miR-33a-5p、miR-34a-5p、miR-122-5p、miR-199a-5p、miR370-3p、miR-378-5p。与肝功正常的患儿相比,各miRNAs血清水平均显著升高（P＜0.05）。在VPA致肝毒性细胞模型中,测定的miR-199a-5p水平与对照组相比显著升高（P＜0.05）。2.miR-199a-5p在VPA致肝毒性作用机制的初步研究:靶点预测表明,miR-199a-5p脂代谢相关靶点包括ATP结合盒1（ABCA1）;荧光素酶报告基因验证试验表明miR-199a-5p与ABCA1的3’UTR结合。miR-199a-5p mimic可降低细胞内ABCA1的转录水平;miR-199a-5p inhibitor可增加细胞内ABCA1的蛋白表达,并减轻细胞内脂质的累积。结论:miR-199a-5p通过降低ABCA1在细胞中的表达从而促进细胞内脂质累积。提示抑制体内miR-199a-5p的水平可能预防或减轻VPA导致的肝脂毒性。