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目的寻找分离、扩增、鉴定脐带间充质干细胞(hUCMSCs)的方法,探讨肝损伤大鼠血清对]hUCMSCs的肝向诱导分化作用,为临床上利用hUCMSCs治疗终末期肝病患者提供实验依据。方法1.采用酶消化法分离培养hUCMSCs,在显微镜下观察提取的脐带源间充质干细胞的形态学改变。2.流式细胞仪检测间充质干细胞标记CD73、CD105及造血干细胞标记CD3、CD45的表达。3.使用成脂诱导剂诱导分化23天后用油红O染色,成骨诱导剂诱导分化21天后用茜素红染色。4.建立急性肝损伤大鼠模型：模型组腹腔注射四氯化碳-大豆油溶液,对照组腹腔注射等剂量的大豆油,48小时后腹主动脉取血,检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST),取大鼠肝组织进行HE染色,显微镜下观察这两组大鼠肝脏病理学变化。5.分别将肝损伤大鼠血清和胎牛血清用于培养hUCMSCs,分为实验组和对照组。实验组：20%模型组大鼠血清配成的培养基培养hUCMSCs,对照组：20%胎牛血清配成的培养基培养hUCMSCs。观察诱导前、实验组及对照组培养后hUCMSCs细胞形态学改变,检测培养液上清AFP、ALB值变化。结果1.倒置显微镜下可见原代hUCMSCs贴壁生长,呈短梭形,6-7天后生长速度加快,细胞呈梭形,表现为编织状或旋涡状生长。2.经流式鉴定发现hUCMSCs表达CD73、CD105等间充质干细胞标记,不表达CD34、CD45等造血细胞标记。3.P3代hUCMSCs成脂定向诱导23天后,未加成脂诱导剂的对照组细胞油红。染色阴性,加入成脂诱导剂的实验组细胞油红O染色强阳性,大部分细胞中可见红色的脂肪空泡。P3代hUCMSCs成骨定向诱导21天后,未加成骨诱导剂的对照组茜素红染色阴性,加入成骨诱导剂的实验组细胞茜素红染色阳性,可见细胞间有黑色颗粒沉积,颗粒大小不等,形态不一,提示有黑色矿物质沉积。4.四氯化碳模型组大鼠血清与对照组相比,ALT、AST升高明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠肝组织光镜下可见肝窦结构消失,肝细胞脂肪变性、灶状坏死,细胞核固缩、碎裂或溶解,肝细胞间及汇管区可见少量炎性细胞浸润。对照组光镜下见肝组织结构清晰,无细胞水肿、变性及坏死,无炎性细胞浸润。5.肝损伤大鼠血清培养hUCMSCs第1天细胞形态变化不大,呈梭形,仍呈编织状或旋涡状生长。第2天细胞呈短梭形,第3天细胞呈类圆形,第4天呈圆形,并有极少量细胞漂浮。对照组细胞呈长纤维状。肝损伤大鼠血清培养hUCMSCs四天后检测上清液ALB发现实验组ALB较诱导前和对照组均有升高趋势(P<0.001),AFP无明显变化。结论1.可从脐带组织中成功提取间充质干细胞。2.提取的干细胞能贴壁生长,可表达间充质干细胞标记CD73、 CD105,不表达造血干细胞标记CD34、CD45,具有向脂肪细胞、骨细胞分化的潜能。3.10%四氯化碳-大豆油溶液腹腔注射可导致急性肝损伤,模型存活率高。4.肝损伤大鼠血清可使脐带间充质干细胞向肝样细胞分化。