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目的(1)分离我国实验小鼠中鼠诺如病毒(SH1603株),并进行基因组序列测定和分析。(2)为实现体外获得有感染性的人诺如病毒,本文对已构建的人诺如病毒感染性克隆进行了验证。方法(1)利用RAW264.7细胞接种病毒,分离鼠诺如病毒SH1603,参照国外已发表的MNV4(DQ223043)基因组序列设计引物,经过重叠的反转录PCR扩增全基因组,利用生物信息学软件对全基因组序列进行分析。(2)将本实验室前期构建的人诺如病毒重组质粒转染BHK-T7细胞,通过免疫印迹(Western Blotting)检测诺如病毒衣壳蛋白的表达,采用Real-time PCR检测病毒基因组RNA的复制情况。结果(1)鼠诺如病毒株SH1603引起RAW264.7细胞的病变,其基因组全长近7238个核苷酸,包括4个开放阅读框(Open Reading Frames,ORFs),预测的ORF1、ORF2、ORF3、ORF4编码蛋白大小分别为186KD,58KD,22KD,23KD,其中ORF1和ORF2之间有14个核苷酸重叠,ORF2和ORF3之间有1个核苷酸重叠,ORF4包含在ORF2中。NCBI Blast比对发现SH1603基因组与MNV4同源性最高(94%)。衣壳蛋白区的进化分析发现SH1603与鼠诺如病毒MNV4(DQ223043)和Berlin0606(EF531291)亲缘关系最近。衣壳蛋白区氨基酸比对发现SH1603与MNV4有四个位点突变,分别是:aa211S→A,aa358I→V,aa404E→L,aa534V→A。(2)人诺如病毒感染性克隆重组质粒转染BHK-T7细胞后观察到轻微的细胞病变;Western blotting检测到诺如病毒衣壳蛋白VP1的表达;Real-time PCR的结果显示转染后人诺如病毒RNA量显著增加,且与转染后时间成正相关。结论(1)我国实验小鼠携带有同国外报道的MNV4具有高度同源性的鼠诺如病毒,为我国相关鼠诺如病毒的研究奠定了基础。(2)本实验室构建的人诺如病毒感染性克隆在BHK-T7细胞中能够增殖和表达,为深入研究人诺如病毒的致病机制提供了工具。