α-淀粉酶作为一种重要的工业酶制剂,广泛应用于淀粉加工、发酵、造纸和纺织等行业中。随着工业生产的发展,对于淀粉酶的耐热耐酸性的研究也成了当今研究热点之一。开发出适应工业生产需求的新的淀粉酶具有重要的学术意义和经济价值。通过一系列实验,确定SF-8菌株为革兰氏阳性菌,在生长后期会形成芽孢。在培养16小时后开始生成淀粉酶,24小时后产量迅速增加,直到32小时后产量进入稳定期。本实验以芽孢杆菌SF-8为出发菌株,分别用PCR扩增和基因文库构建来克隆这个耐热酸性α-淀粉酶基因。将基因片段与pUC19连接用大肠杆菌DH5α进行电转化,最终获得了约5000个转化子,但是遗憾的是未能得到这个基因序列。SF-8菌株在发酵培养基中37℃培养32h后,通过离心、硫酸铵分级盐析沉淀、Macro-Prep DEAE Support离子交换层析和Sephacyl S-100凝胶层析,对该酶进行了分离纯化,最终回收率为36.42%,纯化倍数为7.27。对纯化后的淀粉酶的基本酶学特性进行研究发现:该酶的最适反应温度和pH分别为60℃和5.0。在60℃,pH4.5条件下保存30 min后仍分别保持有66%和72%的催化能力,能够适应工业应用要求。Ca²⁺对该淀粉酶无明显促进作用,但是Mg²⁺和Mn²⁺对于酶活有一定的促进作用。Fe²⁺和Cu²⁺对酶活有一定的抑制作用。酶的活性染色发现该酶的分子量约为58-60kDa。