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目的: 1.通过对BALB/c小鼠和CD4、CD8基因敲除小鼠角膜移植术后免疫排斥反应特点的研究,探讨角膜移植术后免疫排斥反应的发生机制。2.观察基因重组蛋白免疫抑制药物CTLA4-Ig和FK506缓释系统防治高危角膜移植术后免疫排斥反应的效果,探讨防治角膜移植术后免疫排斥反应的用药新途径及其机理。 方法: 1、小鼠穿透性角膜移植术后免疫排斥反应的特征 建立BALB/C小鼠穿透性角膜移植动物模型。对照组:同种系移植;实验组:同种异系移植,供体为C57BL/6小鼠。术后用裂隙灯显微镜观察角膜移植片的存活情况;免疫组织化学检测观察CD11b~+、CD4~+、CD8~+细胞在眼前节的浸润情况;LYVE-1单克隆抗体检测虹膜-睫状体组织中新生淋巴管的变化;应用RT-PCR方法检测发生免疫排斥的角膜组织中IL-10,TNFα,IFNr,B7和CD40的表达情况。同时,通过迟发性超敏反应检测推测角膜免疫排斥时的全身免疫状态。 2、基因敲除小鼠穿透性角膜移植术后免疫排斥特征的研究 试验组:CD4和CD8基因敲除小鼠为受体;对照组:C57BL/6小鼠为受体,供体为BALB/c小鼠,建立穿透性角膜移植动物模型,每组各20只。术后裂隙灯显微镜观察角膜植片的存活情况,免疫组织化学检测术后不同时间眼前段CD4~+和CD8~+细胞的变化。术后2周,每组随机选10只小鼠接受来自BALB/c小鼠的皮肤移植,观察皮肤植片的存活情况。 3、FK506缓释系统(FK506 DDS)抑制兔高危角膜移植术后免疫排斥反应 建立兔高危角膜移植动物模型,随机分为对照组、空白DDS前房植入组、CsA DDS(含CsA 1mg)前房植入组、0.1%FK506滴眼液组和FK506 DDS(含FK506 0.5mg)前房植入组。观察各组角膜移植片存活情况;术后不同时间抽取各组兔房水和静脉血进行FK506药物浓度检测;术后4周及观察期结束时进行角膜的组织病理学检查,并利用原位杂交的方法检测各组角膜植片内IL-2R α、