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为创制防治马铃薯黑痣病的微生物杀菌剂，本文开展了马铃薯黑痣病生防细菌的筛选、鉴定以及抑菌机理研究。采用平板对峙法和温室盆栽试验，从2106株土壤细菌中筛选出有效防治马铃薯黑痣病的生防细菌HMB33604菌株;利用Biolog微生物鉴定系统结合多基因序列比对明确了HMB33604菌株的分类地位;通过发酵培养基筛选及其培养基组成优化，确定了HMB33604菌株发酵的最佳培养基配方;在温室条件下比较丫该菌株发酵液、上清液和菌体悬浮液对马铃薯黑痣病的防治效果;采用定量检测技术明确了HMB33604菌株发酵液、上清液和菌体悬浮液对根际土壤中马铃薯黑痣病菌数量的影响;通过盐酸沉淀、高效液相色谱(HPLC)和超高效液相色谱—四级杆—飞行时间质谱(UPLC-Triple TOF-MS/MS)分离、鉴定了该菌株脂肽提取物的主要活性组份，并明确了脂肽提取物不同组份对马铃薯黑痣病菌的抑菌活性。此外，在温室条件下测定了HMB33604菌株对棉花立枯病和棉花黄萎病的防治效果;评价了HMB33604菌株与生防木霉混配对马铃薯黑痣病的防治效果。主要研究结果如下:
1.采用平板对峙法获得61株对马铃薯黑痣病菌拈抗活性较强的菌株，抑菌带宽6～16mm，抑菌率均大于70％;对61株拮抗细菌进行温室盆栽实验，获得3株对马铃薯黑痣病生防效果较好的菌株（HMB33604、HMB28363和HMB32830），其中HMB33604菌株对马铃薯黑痣病的防治效果最高并且防效稳定。
2.利用Biolog微生物鉴定系统以及16S rDNA、gyrB和phoR多基因序列比对，将HMB33604菌株鉴定为解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)。
3.通过对11种工业培养基进行筛选，将发酵液菌体浓度最高的10号培养基确定为初始发酵培养基。利用正交设计试验优化10号培养基各组份，明确了该菌株发酵培养基的最佳组成为葡萄糖15g，黄豆粉15g，氯化钠5g，硫酸锰0.4g，此时HMB33604菌株发酵液菌体浓度达到1.43×109CFU/mL。
4.温室生测试验结果表明，HMB33604菌株发酵液和上清液对马铃薯黑痣病的防治效果分别为52.16％和66.36％，而菌体悬浮液对马铃薯黑痣病的防治效果仅为16.90％，表明HMB33604菌株主要通过分泌抑菌活性物质来防治马铃薯黑痣病。
5.HMB33604菌株发酵上清液处理的马铃薯根际土中立枯丝核菌的含量与对照相比降低了64.11％，而菌体悬浮液处理的马铃薯根际土中立枯丝核菌的含量与对照相比仅降低了10.39％。结果证明HMB33604菌株主要是通过产生抑菌物质显著降低立枯丝核菌的数量来防治马铃薯黑痣病。
6.通过PCR扩增和序列测定获得3种脂肽合成酶基因的部分序列，质谱（UPLC-Triple TOF-MS/MS）检测和抑菌试验证明，HMB33604菌株产生的脂肽类抗生素主要是伊枯草菌素、表面活性素和生产素，其中伊枯草菌素和丰产素表现出明显的抑菌活性。
7.分别评价了解淀粉芽胞杆菌HMB33604菌株和4株木霉菌(LTR-2、T11W、21990、7号菌株)混配对马铃薯黑痣病的防治效果。结果表明，HMB33604菌株和LTR-2菌株混配对马铃薯黑痣病的防治具有协同增效作用。LTR-2菌株(108CFU/g)与HMB33604菌株发酵液(109CFU/mL)按照1∶300(g/v)比例混配对马铃薯黑痣病的防治效果为79.98％，防效比单独使用HMB33604菌株（防效69.7％）提高了10.28％，与单独使用木霉LTR-2(51.3％)相比，防效提高了28.68％。
8.进一步试验证明HMB33604菌株还能有效防治棉花立枯病和黄萎病，防治效果分别为58.56％和52.78％。
1.采用平板对峙法获得61株对马铃薯黑痣病菌拈抗活性较强的菌株，抑菌带宽6～16mm，抑菌率均大于70％;对61株拮抗细菌进行温室盆栽实验，获得3株对马铃薯黑痣病生防效果较好的菌株（HMB33604、HMB28363和HMB32830），其中HMB33604菌株对马铃薯黑痣病的防治效果最高并且防效稳定。
2.利用Biolog微生物鉴定系统以及16S rDNA、gyrB和phoR多基因序列比对，将HMB33604菌株鉴定为解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)。
3.通过对11种工业培养基进行筛选，将发酵液菌体浓度最高的10号培养基确定为初始发酵培养基。利用正交设计试验优化10号培养基各组份，明确了该菌株发酵培养基的最佳组成为葡萄糖15g，黄豆粉15g，氯化钠5g，硫酸锰0.4g，此时HMB33604菌株发酵液菌体浓度达到1.43×109CFU/mL。
4.温室生测试验结果表明，HMB33604菌株发酵液和上清液对马铃薯黑痣病的防治效果分别为52.16％和66.36％，而菌体悬浮液对马铃薯黑痣病的防治效果仅为16.90％，表明HMB33604菌株主要通过分泌抑菌活性物质来防治马铃薯黑痣病。
5.HMB33604菌株发酵上清液处理的马铃薯根际土中立枯丝核菌的含量与对照相比降低了64.11％，而菌体悬浮液处理的马铃薯根际土中立枯丝核菌的含量与对照相比仅降低了10.39％。结果证明HMB33604菌株主要是通过产生抑菌物质显著降低立枯丝核菌的数量来防治马铃薯黑痣病。
6.通过PCR扩增和序列测定获得3种脂肽合成酶基因的部分序列，质谱（UPLC-Triple TOF-MS/MS）检测和抑菌试验证明，HMB33604菌株产生的脂肽类抗生素主要是伊枯草菌素、表面活性素和生产素，其中伊枯草菌素和丰产素表现出明显的抑菌活性。
7.分别评价了解淀粉芽胞杆菌HMB33604菌株和4株木霉菌(LTR-2、T11W、21990、7号菌株)混配对马铃薯黑痣病的防治效果。结果表明，HMB33604菌株和LTR-2菌株混配对马铃薯黑痣病的防治具有协同增效作用。LTR-2菌株(108CFU/g)与HMB33604菌株发酵液(109CFU/mL)按照1∶300(g/v)比例混配对马铃薯黑痣病的防治效果为79.98％，防效比单独使用HMB33604菌株（防效69.7％）提高了10.28％，与单独使用木霉LTR-2(51.3％)相比，防效提高了28.68％。
8.进一步试验证明HMB33604菌株还能有效防治棉花立枯病和黄萎病，防治效果分别为58.56％和52.78％。