【摘 要】
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乳脂是牛乳的主要成分之一,可提供能量和改善乳风味,具有较高的营养价值,同时乳脂含量是乳品工业的重要经济指标,影响着牛乳的质量和价格。乳腺是乳脂合成的主要器官,嗜乳脂
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乳脂是牛乳的主要成分之一,可提供能量和改善乳风味,具有较高的营养价值,同时乳脂含量是乳品工业的重要经济指标,影响着牛乳的质量和价格。乳腺是乳脂合成的主要器官,嗜乳脂蛋白BTN1A1(BTN)在乳腺上皮细胞合成脂滴的过程中发挥着重要作用。因此,本试验采用超表达BTN蛋白,研究其在乳腺细胞乳脂滴形成中的作用,为阐明乳腺上皮细胞的脂肪合成机制打下基础。本试验首先获得BTN-PEGFP-N1重组载体,将其转染至奶牛的乳腺上皮细胞MAC-T中,通过荧光显微镜观察带有绿色荧光BTN蛋白的亚细胞定位;以Lenti CRISPR V2质粒为骨架构建BTN重组慢病毒载体,包装成病毒后感染MAC-T细胞,构建Btn超表达的MAC-T细胞系并鉴定其基因型;通过实时荧光定量PCR(QPCR)技术检测Btn基因m RNA的超表达水平;用尼罗红染色法以及用酶标仪观察Btn超表达对脂滴形态的影响。结果表明:获得的Btn基因CDS区序列1578 bp,通过荧光显微镜观察可发现Btn定位于细胞质膜顶端;成功构建与Btn重组的慢病毒载体,并实现了利用慢病毒介导Btn在MAC-T细胞中的超表达,经过嘌呤霉素筛选得到了Btn1a1超表达52961-MAC-T细胞系;与对照组细胞相比,52961-MAC-T细胞的Btn基因m RNA表达水平升高400倍(p<0.0001);检测脂滴的荧光值发现Btn超表达显著增加了脂滴含量(p<0.0001)。本研究表明,奶牛乳腺上皮细胞中Btn超表达可以影响细胞中的脂肪合成基因表达,对乳腺上皮细胞中的脂滴合成产生促进作用。
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