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第一部分 miR-106a在人结直肠癌组织中表达的研究目的:通过实时定量荧光PCR(qRT-PCR)技术检测miR-106a在结直肠癌癌组织、及癌旁正常粘膜中的表达水平,并分析其与结直肠癌患者临床病理特征之间的关系。探讨miR-106a对结直肠癌的诊断价值。方法:1收集2013年10月至2014年3月于河北医科大学第一医院普外科行手术治疗的结直肠癌患者42例,所有病例术前未接受任何形式的放化疗干预,临床病例资料完整。所有病理均由两名有经验的病理医师进行诊断。在术中留取新鲜肿瘤组织,以及距离肿瘤边缘至少5cm的癌旁正常粘膜组织标本。2利用Trizol提取组织中总RNA,再通过反转录获得c DNA,最后通过实时定量荧光PCR反应测定miR-106a的表达水平。3采用统计软件SPSS 19.0对数据进行分析。两组之间比较使用Mann Whitney检验,其中P﹤0.05为差异有统计学意义。非正态分布的数据以P50(P25,P75)表示,正态分布的数据以均数±标准差表示。结果:1在42例结直肠癌组织中的miR-106a表达量明显高于癌旁组织[26.2882(14.5358,49.3492)vs.8.7187(5.4891,13.6726)],其差异有统计学意义(P<0.0001)。2 miR-106a的表达水平与结直肠癌组织的病理学类型密切相关,腺癌组织的表达量要高于粘液样癌组织(100.96±262.20 vs.18.14±18.22,P=0.0348);浸润深度为T1、T2的癌组织表达量要高于浸润深度为T3、T4的癌组织(271.91±525.60 vs.47.24±74.53,P=0.0431);中高分化程度的癌组织表达量要高于低分化的癌组织(108.87±272.79 vs.18.12±19.20,P=0.0343)。而与患者的年龄、性别、分期、肿瘤位置、有无淋巴结转移、有无远处转移等无关。结论:miR-106a在结直肠癌组织中高表达,并且与结直肠癌组织的病理学类型、浸润深度及分化程度有关,有潜力作为判断结直肠癌患者预后的生物学指标。第二部分miR-106a在人结直肠癌患者血浆中的表达的研究目的:血浆miRNA作为一种非侵入性的肿瘤诊断和预后评价的标志物显示出良好的应用前景。研究miR-106a在人结直肠癌患者血浆中的表达量,并分析其在术前与术后的差异,同时分析其与临床病理资料的关系。了解血浆miR-106a对人结直肠癌的诊断价值。方法:1收集2013年10月至2014年3月于河北医科大学第一医院普外科行手术治疗的结直肠癌患者40例,所有病例术前未接受任何形式的放化疗干预,临床病例资料完整。所有病理均由两名有经验的病理医师进行诊断。收集其术前与术后7天的外周血。同时收集同期于河北医科大学第一医院健康体检人群的外周血42例,年龄性别与试验组匹配,且无肿瘤病史。2利用miRNeasy Serum/Plasma Kit提取血浆中总RNA,再通过反转录获得c DNA,最后通过实时定量荧光PCR反应测定miR-106a的表达水平。3采用统计软件SPSS 19.0对数据进行分析。两组之间比较使用Mann Whitney检验,其中P﹤0.05为差异有统计学意义。非正态分布的数据以P50(P25,P75)表示,正态分布的数据以均数±标准差表示。用ROC曲线评价血浆miR-106a表达量在人结直肠癌中的诊断价值。结果:1本组结直肠癌患者血浆中miR-106a表达量比同期健康体检人群血浆中miR-106a表达量高,差异具有统计学意义(P=0.0041)。2术后7天病人血浆中miR-106a表达量比术前要低(0.16±0.18 vs.8.80±40.50),但是并没有统计学意义(P=0.16)。3 ROC曲线下面积为0.858(95%Cl:0.772-0.944),区别结直肠癌患者和健康人的敏感性为73.8%,特异性为87.1%。ROC曲线分析显示血浆中miR-106a表达量对区分结直肠癌患者与健康人有一定诊断价值。4结直肠癌患者血浆中miR-106a的表达量与年龄、性别、分期、病理类型、位置、有无淋巴结转移、有无远处转移、分化程度均无关(P>0.05)。结论:结直肠癌患者血浆中miR-106a表达量较健康人群明显上调,血浆miR-106a用于早期诊断结直肠癌具有一定意义。但血浆中miR-106a表达量与结直肠癌患者临床病理资料无明显相关性。miR-106a有潜力成为结直肠癌的生物标记物。第三部分miR-106a在人结直肠癌细胞株中功能的研究目的:研究miR-106a对结直肠癌细胞株HCT116生物学行为的影响,初步探讨miR-106a在结直肠癌发生发展中可能的作用机制。方法:1利用lipofectamine 2000将miR-106a mimic、mimic control、miR-106a inhibitor、inhibitor control分别转染入HCT116细胞内,48h后分别测定miR-106a的表达量。2细胞转染后应用CCK-8试剂盒检测细胞增殖,分别测定1d、2d、3d、4d、5d的OD值,绘制细胞生长曲线,比较miR-106a对结直肠癌细胞增殖的影响。3细胞转染后采用Annexin V-FITC试剂盒,利用流式细胞术研究miR-106a对结直肠癌细胞凋亡的影响。结果:1转染miR-106a mimic与转染miR-106a mimic control相比HCT116细胞中miR-106a的表达量上升,转染106a inhibitor与转染miR-106a inhibitor control相比HCT116细胞中miR-106a的表达量下降。其差异均有统计学意义(P<0.05)。2转染miR-106a mimic与转染miR-106a mimic control相比HCT116细胞增殖明显增加,转染miR-106a inhibitor与转染miR-106a inhibitor control相比HCT116细胞增殖明显受到抑制,差异均有统计学意义(P<0.05)。3转染miR-106a mimic与转染miR-106a mimic control相比HCT116细胞早期凋亡明显减少,其早期凋亡率以均数±标准差表示(miR-106a mimic vs.mimic control,8.68%±0.75%vs.12.45%±1.16%,n=4);转染miR-106a inhibitor与转染miR-106a inhibitor control相比HCT116细胞早期凋亡明显增加,其早期凋亡率以均数±标准差表示(miR-106a inhibitor vs.inhibitor control,8.803%±0.27%vs.6.733%±0.60%,n=4),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:上调miR-106a的表达量可以促进HCT116细胞增殖,并抑制HCT116细胞的早期凋亡。抑制miR-106a的表达量可以抑制HCT116细胞增殖,并促进HCT116细胞的早期凋亡。提示miR-106a可能是通过抑制HCT116细胞早期凋亡实现其促癌基因的作用。