苦参碱对体外培养的人角膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响

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目的:研究苦参碱(Matrine,简称Mat)对体外培养的人角膜成纤维细胞(human corneal fibroblasts,HCFs)增殖和凋亡的影响。 方法:将分离培养的HCFs纯化后,采用10、20、40、80、160、320 mg/L等6种不同浓度的Mat干预其体外培养的HCFs的生长。在用药后的不同时间,用MTT比色法测定药物对细胞增殖的影响,以乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)为指标观察细胞毒性,流式细胞仪(Flow cytometry,FCM)检测细胞周期和细胞凋亡,从而观察Mat对HCFs增殖和凋亡的影响。 结果: (1)MTT比色法结果显示:用浓度分别为10、20、40、80、160、320 mg/L 的Mat处理HCFs24h、48h和72h后,HCFs的增殖与对照组相比均表现为不同程度的明显抑制(P<0.05),并且这种抑制呈明显的浓度-时间依赖性。 (2)LDH活性值检测显示:160 mg/L以下的药物浓度处理细胞48h后的LDH值与对照组相比无明显差异(P>0.05),而320 mg/L 的Mat则引起LDH值的明显升高(P<0.05),说明160 mg/L以下的药物浓度未引起明显的细胞损害。 (3)流式细胞仪检测显示:160 mg/L以下的Mat药物浓度能够抑制HCFs的增殖,G0/G1期细胞数目虽稍增加,但与对照组相比未见明显差异(P>0.05),同时G2/M期细胞数目增加,S期细胞数目减少,与对照组相比有显著性差异(P<0.05),说明Mat将HCFs的细胞周期阻滞在G2/M期,干扰有丝分裂前的准备,而地塞米松(Dexamethasone, Dxm)对HCFs的细胞周期影响主要是在G0/G1期,同时Mat在80 mg/L以下的药物浓度未引起明显的凋亡率的改变(P>0.05)。 结论:  (1)Mat具有明显抑制HCFs增殖的作用,而且抑制作用呈时间-剂量依赖性。 (2)Mat能使HCFs的细胞周期阻滞于G2/M期,而Dxm则使HCFs的细胞周期阻滞在G0/G1期。 (3)Mat在80mg/L以下浓度时,并未引起HCFs明显的凋亡率改变。 (4)Mat有可能成为减少或预防PRK术后并发症的一种新型选择用药。
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