论文部分内容阅读
大肠杆菌F4引起的仔猪腹泻给养猪业造成了很大的经济损失,如果能够找到抗大肠杆菌腹泻的基因,通过抗病育种培育出抗大肠杆菌腹泻的猪群,无疑将有很重要的意义。大肠杆菌F4粘附于仔猪小肠上皮细胞是其致腹泻的前提条件,而F4能否粘附是由仔猪小肠上皮有无受体决定的,如果仔猪小肠上皮有受体,则F4粘附于小肠上,否则不粘附。只有大肠杆菌F4特异地粘附到小肠上皮后,细菌才可以抵御肠道蠕动及肠液冲刷作用,定居于小肠大量繁殖并分泌毒素,进而引起仔猪腹泻。因此,如果能找到决定受体有无的基因就可以培育抗腹泻猪群,而寻找基因的一个基础就是精细定位基因所在的区段。
为了精细定位仔猪F4受体基因,本实验利用了16个家系440份耳组织样品和366份小肠样品。表型数据为F4ab、F4ac、F4ad三种菌株与小肠的粘附型数据。在前人研究的基础上,我们在S0293与SW225之间选择了10个微卫星标记,利用荧光引物PCR结合AB1377测序仪荧光电泳扫描以及GENESCAN3.0和GENOTYPER2.5软件分析技术判定微卫星基因型。利用家系资料对不符合孟德尔遗传规律的基因型进行校正或者剔除,将保留下来的微卫星标记基因型用于下一步的分析。由于连锁紧密时检测出连锁很困难,但可检测出关联,尤其当标记与疾病基因连锁非常紧密时,关联分析的统计效力远高于连锁分析,因此本实验利用PDT对粘附型数据和标记基因型数据进行关联分析。
通过粘附实验发现,大白,长白,松辽黑猪与F4ab,F4ac,F4ad之间粘附情况存在显著差别(P<0.01),松辽黑猪以非粘附型为主,很少有强粘附型个体,3种菌株的非粘附型比例分别为63%,72%,47%,而长白猪中粘附型和强粘附型比例较高,非粘附型分别只占13%,20%,25%,大白猪介于二者之间,非粘附比例分别为43%,44%,44%。在同一品种猪内,3种菌株的粘附比例在松辽黑猪内和大白猪内有极显著差异,但在长白猪中无显著差异。
分析粘附型与仔猪断奶前生产性能的关系发现,对3种F4菌株表现粘附(有受体)的仔猪其初生重、断奶重和断奶前日增重与表现为非粘附(无受体)的仔猪无显著差异(p>0.05)。
利用PDT进行关联分析的结果表明,在我们所选择的区段内不存在F4ad受体基因座位。对于F4ac受体基因来说,把弱粘附归为粘附时,F4ae受体基因与S0283与CGT25存在显著相关,与CGT25的相关性最高,并达到极显著水平,把弱粘附归为非粘附时,F4ac受体基因与S0283,CGT25,SWl876的相关均达到显著水平,但是与S0283的相关性最高,达到极显著水平。我们推断在S0283-CGT25或者S0283-CGT25-SWl876之间1.6cM的范围内存在影响F4ac受体有无的基因座位。对F4ab受体基因来说,把弱粘附归为粘附时,F4ab受体基因与S0283、CGT25、SW1833显著相关,其中与S0283的相关性最高,当赋予各家系相同的权重时,F4ab受体基因与CGT25不存在相关。把弱粘附归为非粘附时,F4ab受体基因与S0283,CGT25,SW1876,SW1833都显著相关,给予大家系较大的权重时SW1833与F4ab受体基因的相关性最高。在该区段内可能存在两个影响F4ab受体有无的基因座位,或者只存在一个基因座位,仍需进一步研究。通过本研究发现,F4ab受体基因与F4ac受体基因紧密连锁。