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目的 Cyclin E和P27是参与细胞周期G1期向S期转换的一对正负调控因子，它们的表达异常与肿瘤的生物学行为密切相关。本实验在检测原发性星形细胞肿瘤中Cyclin E和P27表达情况的同时，对这两个细胞周期调控因子的表达程度与肿瘤病理分级之间的关系进行了评估。 方法 标本来源 46例原发性星形细胞肿瘤标本和8例非肿瘤脑组织标本均为中国医科大学第二附属医院神经外科1999年4月～2002年3月三年间手术切除标本，所有肿瘤标本均按照WHO于1993年制定的中枢神经系统肿瘤分类标准重新确定病理诊断和分级，其中包括WHO Ⅰ级10例、Ⅱ级9例、Ⅲ级15例和Ⅳ级12例。将WHO分级为Ⅰ、Ⅱ级的星形细胞肿瘤定义为低恶性度组，WHO分级为Ⅲ、Ⅳ级的星形细胞肿瘤定义为高恶性度组。 免疫组化染色方法 全部54例标本经甲醛固定和石蜡包埋后，进行免疫组织化学染色，检测Cyclin E和P27的表达。具体步骤如下：首先将石蜡标本制成5微米厚切片，常规二甲苯脱蜡、酒精至水后，切片浸入3％H2O2溶液中，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。切片浸入0.01M枸橼酸溶液（pH=6.0）中，用500W微波炉加热进行抗原修复15分钟。切片滴加正常二抗动物血清封闭，室温下孵育40分钟，消除非特异性反应。切片分别滴加抗Cyclin E和P27单克隆抗体，在’T恒温箱中孵育过夜，然后滴加生物素标记的H抗，室温下孵育90分钟。应用超敏SP试剂盒，按照SI法常规显色。最后用苏木素复染切片。 凡细胞核出现明显深棕色颗粒者定义为Cyclin E和i7染色阳性细胞，仅细胞浆出现深棕色颗粒定义为阴性细胞。每张切片分别在5个高倍视野k00 X)下，累计计数不少于1000个细胞，计算阳性细胞的百分率，即标记指数作为实验结果。 统计学分析方法 应用Student－t检验，对非肿瘤脑组织和各级别星形细胞肿瘤之间 Cnclin E和 P27的表达情况分别进行比较，应用 Speannan等级相关分析，分别验证 Cyclin E LI、P27 LI与肿瘤病理分级之间的相关性。定义P＜O．05为差异有统计学意义。 结 果 Cyclin E和 my在全部的例标本中均有不同程度的表达，其中 Cyclin E 11范围0．5呢一31．6呢，平均 13．59％。9．66阮，t7 11范围3．6％－92．2％，平均44．52％。25．22％。在对照组和各级别星形细胞肿瘤之间、对照组与低恶性度组之间、低恶性度组与高恶性度组之间，Cyclin E和 P27的表达程度均有显著性差异口＜0．05人对Crclin E LI＼P27 11与肿瘤病理分级之间的相关性进行分析的结果显示，Cyclin E 11随星形细胞肿瘤病理级别增高而增高，两者呈正相关k＝0．5四，P＜0．0厂，n7 u随星形细胞肿瘤病理级别增高而明显减低，两者呈负相关卜一一o．7317，P＜o．of人此外，CyClill IJ与P27 LI之间也呈明显的负相关卜一一O．7538，P＜o＊二)。 ·2· 讨 论 Cyclin E和P27是参与细胞周期＊期向 S期转换的一对正负调控因子。其中 Cyclin E是细胞周期蛋白家族中的一员，它的表达在GI晚期达到高峰，能结合并激活CDKZ，形成的Cyclin E－CDKZ复合物有较强的蛋白激酶活性，能引起PRB的磷酸化，从而启动细胞周期由＊期向S期的转换。P27是一种CDKs的抑制因子，它能特异性的结合并抑制 CyClin EC 等复合物的活性，从而对细胞周期进程起负调节作用。 目前在多种人类肿瘤中均检测到了 Cyclin z和PZv的异常表达，其中在肺癌万腺癌、膀肤癌和胃癌中的表达异常还被证实与肿瘤病理分级相关。本实验对8例非肿瘤脑组织和46例原发性星形细胞肿瘤标本的检测结果：显示，Cych z和my在全部标本中均有不同程度的表达。在对照组和各级别星形细胞肿瘤之间、对照组与低恶性度组之间、低恶性度组与高恶性度组之间，CyclinE和PZ 7的表达程度均有显著性差异河＜o．05人在原发性星形细胞肿瘤中，Cyclin E LI有随星形细胞肿瘤病理级别增高而增高的趋势而P27 LI有随星形细胞肿瘤病理级别增高而减低的趋势。应用SPeannan等级相关分析证实，星形细胞肿瘤的病理分级与 Cyclin E LI之间呈正相关，而与 P27 11之间呈负相关(P＜0．01人此外，对CyClin E LI和R17 LI之间的相关性分析结果显示，两者之间呈明显的负相关灯一o．01八 Tlya等曾报道在体外培养的人胶质瘤细胞系中，当CyclinE表达减低而P27表达增高时胶质瘤细胞处于细胞周期阻滞或生长抑制状态。结合本实验的结果，可以推测 Cyclin E和u7的表达水平同样能反映体内肿瘤细胞的增殖能力，它们的表达异常与星形细胞肿瘤的临床生物学行为密切相关。CyClin E和P27单克 ·3·隆抗体的免疫组化染色程度可作为反映原发性星形细胞肿瘤恶性程度的有效指标，而当两者联合应用时对肿瘤恶性程度的判断会更有意义。 结 论 细胞周期调控因子Cyclin E和P27在各