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目的:本课题主要研究转化生长因子-β1(transformed growth factor-β1,TGF-β1)对人成熟树突状细胞(dendritic cells,DCs)骨架蛋白的影响及潜在的分子机制,为深入研究肿瘤的免疫逃逸机制和提高基于DCs的抗肿瘤免疫治疗疗效提供理论依据。方法:利用免疫磁珠从新鲜人外周血(肝素抗凝)中分选出CD14+单核细胞,在体外经GM-CSF、IL-4诱导培养5天后分化为未成熟树突状细胞(immature dendritic ce lls,im DCs),继续经肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)诱导培养3天后分化为成熟树突状细胞(mature dendritic cells,m DCs),分别收集im DCs和m DCs,与Bel7402肝癌细胞共培养,并分为:im DCs对照组(I),im DCs与Bel7402肝癌细胞共培养组(II),m DCs对照组(III),m DCs与Bel7402肝癌细胞共培养组(IV),常规培养48小时后收集各组DCs细胞,抽提总RNA,利用树突状细胞基因芯片对细胞功能调控相关基因进行检测。另外,用5 ng/ml浓度的TGF-β1分别处理m DCs15,30,60,120,360,720,1440 min,观察细胞骨架F-actin结构的影响及p-Smad2/3,Smad2/3,cofilin1,profilin1在细胞内的分布及其表达量的变化,并比较TGF-β1的Smad信号通路被阻断后,m DCs的F-actin结构变化,以及m DCs的运动能力和刺激T细胞增殖的能力差异。结果:基因芯片结果显示(II/I)差异表达的基因有1531个(与对照组相比,变化表达倍数≥2),其中上调598个,下调933个;(IV/III)差异表达的基因有663个(与对照组相比,变化表达倍数≥2),其中上调290个,下调373个。这些基因功能主要涉及信号转导、免疫应答、细胞粘附等;Western blot提示经5 ng/ml TGF-β1处理120min后,m DCs中Smad2/3明显上调,p-Smad2/3,cofilin1,profilin1等发生了下调;免疫荧光提示,5ng/ml TGF--β1处理后m DCs中的Smad2散在分布在细胞质中,而p-Smad2/3主要分布在细胞核周围。此外,F-actin发生重组,细胞突起物变短变稀,这一现象在经SB431542阻断TGF-β1/Smad通路后恢复至正常水平。Transwell和混合淋巴反应结果提示,经SB431542阻断TGF-β1/Smad通路后,TGF-β1对m DCs运动能力和刺激T细胞增殖的能力的抑制作用得到改善。结论:肝癌微环境对DCs的影响涉及多个基因的表达调控,这些基因控制并影响着DCs代谢、运动和增殖分化。TGF-β1可以通过Smad通路引起m DCs细胞骨架重组、运动能力和刺激T细胞增殖的能力下降,这对进一步深入理解DCs的生物学特性、肿瘤的免疫逃逸机制和提高基于DCs的临床治疗效率来说具有重要意义。