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西兰花营养丰富,富含维生素C、纤维等营养成分,是广大消费者喜爱的蔬菜之一。因为其顶端有紧凑形成的花蕾,组织结构幼嫩,容易受到机械损伤和病原真菌污染,破坏西兰花的表面,导致大量的经济损失。西兰花较严重的病害为链格孢引起的黑斑病,病症为初期花球表面出现黑点,随后迅速黄化、腐败,导致西兰花加速衰老。本文以西兰花为对象,对其中的病原链格孢进行分离鉴定,讨论贮藏温度对Alternaria alternata菌丝和孢子生长的影响,探究A.alternata侵染对西兰花自身品质的影响,通过优化后的培养条件富集产细胞壁降解酶,分析粗酶液对西兰花的致病作用,探究A.alternata的致病机理,并在体外研究了肉桂醛、肉桂酸对西兰花A.alternata生长的抑制作用,以期为西兰花病害研究提供理论参考、病害防治提供新的思路。1.西兰花链格孢菌的分离纯化和鉴定:(1)西兰花花球感染病原的侵害明显高于花梗,可能是因为花蕾组织许多幼嫩的组织和其暴露在空气中。鉴定的黑斑病的病原菌有2种链格孢,分别为A.alternata和A.tenuissima,A.alternata的致病力较强。2.温度对A.alternata生长和致病力的影响:(1)在4℃、18℃和25℃贮藏温度下温度下探究A.alternata的生长能力和致病性,A.alternata在下4℃、18℃和25℃均能生长,且存在致病力,货架期温度18℃生长的速率较快;4℃低温对不能完全抑制A.alternata的菌丝生长和孢子萌发。(2)55℃水浴、85℃水浴处理10 min的方法能有效地抑制A.alternata的菌丝生长和孢子萌发。3.A.alternata侵染对西兰花品质影响:(1)A.alternata侵染西兰花后,无论是花球还是花梗在可溶性蛋白、可溶性糖、维生素C、叶绿素、可滴定酸和MDA均有变化,且花球比花梗的品质变化更严重,说明花球更易遭受链格孢菌的侵染。(2)A.alternata侵染西兰花后,花球处理组的可溶性蛋白变化差异较大,且迅速黄化,推测A.alternata侵染过程中西兰花花球的加速衰老可能与可溶性蛋白增加、叶绿素降解有关。4.A.alternata产3种细胞壁降解酶培养条件的正交优化及其对西兰花的致病作用:(1)A.alternata产Cx最佳工艺:培养温度是30℃,培养基初始pH是7,培养碳源是0.5%的CMC,培养时间是6 d,培养氮源是1%的KNO3,Cx活是110.53±1.02 U/mL。(2)A.alternata产PMG最佳工艺:培养温度是30℃,培养基初始pH是5,培养碳源是1%的果胶,培养时间是6 d,培养氮源是1%的KNO3,PMG活是128.75±0.96 U/mL。(3)产β-GLU最佳工艺:培养温度是30℃,培养基初始pH是6,培养碳源是1%的葡萄糖,培养时间是6 d,培养氮源是1%的KNO3,β-GLU活是108.78±4.33 U/mL。(4)在西兰花活体内均能检测到3种细胞壁降解酶活,在花球中的细胞壁降解酶酶活高于花梗中;PMG酶在A.alternata产生的3种细胞壁降解酶中酶活值是最高的。(5)粗酶液直接处理西兰花花球,3种粗酶液均对花球造成损伤,发现PMG处理花球损伤最为严重;通过浸解作用观察,PMG处理在还原糖和电导率变化较大,Cx高于β-GLU。链格孢对西兰花的致病机理是Cx、PMG和β-GLU3种细胞壁降解酶的综合作用,其中PMG起主要作用。5.3种物质在体外对西兰花A.alternata的抑制作用:(1)在浓度为500μg/mL时,咪鲜胺、肉桂酸和肉桂醛都表现为对西兰花A.alternata100%的抑制率,而绿原酸抑菌率为52.73±3.45%,后期试验对象选取为咪鲜胺、肉桂醛和肉桂酸。(2)咪鲜胺、肉桂酸和肉桂酸在50-250μg/mL均对西兰花A.alternata都具有抑制作用,对照组咪鲜胺表现为在浓度为200μg/mL时,抑菌率达到100%。与对照组相比,在药剂浓度为250μg/mL时,肉桂醛的抑菌率是100%,而肉桂酸的抑菌率是61.54±6.32%,说明肉桂醛对西兰花A.alternata的抑制效果优于肉桂酸。(3)试验结果表明咪鲜胺的抑制作用最强,EC50为61μg/mL,肉桂酸和肉桂醛抑制效果次之,EC50分别为0.200和0.145μg/m L。