芪合成酶(STS)是催化植物体内芪类化合物合成的关键酶，乙醛脱氢酶(ALDH)是广泛存在于动物、植物和微生物体内的一类酶，参与体内多种代谢途径，目前它在植物抗病反应中的作用还有待进一步了解。本实验室研究人员通过mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)及cDNA末端快速扩增技术(RACE)，从高抗白粉病的华东葡萄白河-35-1中克隆分离得到中国野生葡萄STS基因、ALDH基因。本研究利用所获基因通过构建该基因原核表达载体，试图从体外表达途径对该基因的功能进行验证，为该基因在基因工程上的进一步应用和研究提供依据，主要取得以下结果： 1.根据已获STS基因、ALDH基因cDNA全长序列，分别设计一对特异性PCR引物，以华东葡萄白河-35-1的5’RACEcDNA第一链为模板，经PCR扩增，分别获得大小约1200bp和1600bp的DNA片段，经过克隆测序。 2.将ALDH基因定向克隆到原核表达载体上pGEX-4T-1上，重组表达载体pGEX-ALDH同样经BamHI和SmaI双酶切处理，切下片段与已知ALDH基因片段大小一致，证明ALDH基因正确连接到表达载体上，重组表达载体构建成功。将重组表达载体pGEX-ALDH转化表达菌E.coliBL21中，经诱导培养后，未见有明显特异性表达。 3.将STS基因从定向克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上，重组表达载体pGEX-STS同样经BamHI和XhoI双酶切处理，切下片段与已知STS基因片段大小一致，证明STS基因正确连接到表达载体上，重组表达载体构建成功。 4.GST-STS融合蛋白主要以包涵体形式表达，通过高浓度变性剂溶解包涵体和低浓度变性剂梯度透析对该包涵体进行了复性。复性的蛋白可通过GST亲和介质进行富集、纯化，为进一步研究基因的功能提供了依据。 5.以GST-STS融合蛋白包涵体作为抗原免疫家兔，获得的多克隆抗血清按1：3000稀释后，经Westernblotting检测对目的蛋白特异性良好，能够与复性、纯化的GST-STS融合蛋白产生抗原-抗体识别反应。