靶向Ang2的siRNA联合奥沙利铂对子宫内膜癌裸鼠移植瘤生长的影响

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目的:观察靶向血管生成素2(Angiopoietin2,Ang2)的小干扰RNA联合奥沙利铂对子宫内膜癌裸鼠移植瘤生长和血管的抑制作用。   方法:每只裸鼠皮下注射约2.0x106的ishikawa细胞,建立子宫内膜癌裸鼠移植瘤模型。成瘤后40只裸鼠随机分为5组:空白对照(生理盐水)组、阴性对照(pCMV-neg)组、pCMV—shRNA—Ang2(siRNA—Ang2)组、奥沙利铂组及siRNA-Ang2和奥沙利铂联合组,分别进行治疗。每3天进行一次瘤内注射,治疗27天后测量肿瘤体积计算抑瘤率,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblotting分别检测各组肿瘤组织中Ang2 mRNA和Ang2蛋白质的表达水平,免疫组织化学技术检测并定量计数各组肿瘤组织微血管。   结果:细胞注射后第7天瘤体开始出现,第14天肿瘤直径达5-7mm。治疗结束后,各组移植瘤体积进行比较,奥沙利铂组、siRNA-Ang2组以及联合用药组与空白对照组比较肿瘤体积明显减小,差别具有统计学意义(P值均<0.01)。而联合用药组肿瘤体积又明显小于奥沙利铂组和siRNA-Ang2组(P值均<0.01)。阴性对照组肿瘤体积与空白对照组相比无明显差异(P=0.067)。RT-PCR产物经电泳分析显示Ang2 mRNA在siRNA-Ang2组、奥沙利铂组和联合用药组的表达均明显低于空白对照组和阴性对照组,差别有统计学意义(P值均<0.01)。而联合用药组Ang2mRNA表达量又明显低于奥沙利铂组和siRNA-Ang2组,差别具有统计学意义(P值均<0.01)。Western blotting检测各组Ang2蛋白质表达量,结果与RT-PCR相符。奥沙利铂组、siRNA-Ang2组以及联合用药组三组肿瘤组织MVD较阴性对照组和空白对照组均减少,差别具有统计学意义(P值均<0.01),而联合用药组MVD又明显少于奥沙利铂组和siRNA-Ang2组,差别具有统计学意义(P<0.001)。   结论:靶向Ang2的小干扰RNA可以在体内抑制人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长,降低Ang2 mRNA及蛋白质的表达。siRNA-Ang2与奥沙利铂联合应用提高了奥沙利铂的抗肿瘤效果,联合用药比单药抗子宫内膜癌的效果更好,具有协同作用。  
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