鸡新城疫(ND)是鸡的一种急性、高度接触性、烈性传染病,对养禽业危害极大,被国际兽医局(OIE)列为对动物危害最大的法定通报传染病之一,每年给国家造成上百亿元的经济损失。近年来,在新城疫LaSota疫苗免疫鸡群及高抗体鸡群中不断有新城疫的发生。为此我们研究了疫苗毒存在下新城疫强毒株的检测及高免下不同基因型新城疫疫苗保护作用。一、扩增F蛋白基因序列半巢式RT-PCR快速灵敏检测及区分NDV本研究建立了一种灵敏度高、特异性强、可以检测并区分新城疫病毒(NDV)强弱毒的半巢式RT-PCR方法。根据GenBank收录的新城疫F蛋白基因序列,我们设计了一对通用外引物扩增全部NDV毒株,又在F0裂解位点处设计了一条套式引物,只扩增NDV强毒株。随后对62株NDV毒株包括52株未知毒力的06年野毒株进行测试,发现此方法可以准确、快速地区分NDV毒力,随后的裂解位点测序、空斑形成能力、MDT和ICPI指数检验结果也充分验证了这一点。而且,传统方法很难区分的13株Class I毒株,使用此半巢式RT-PCR方法亦成功区分。在对半巢式RT-PCR方法的优化中,证实联合使用2%浓度的DMSO和0.06 mg/ml乙酰化BSA添加剂在一步RT-PCR中可以显著增加检测灵敏度且相互间无干扰。在对尿囊液样品的检测中,F48E9的检测限为2 PFU;在对病毒排毒的检测中,采肛拭和喉头拭样本,发现可以在弱毒活疫苗干扰的情况下检测出与尿囊液样相同数量级的流行Ⅶd强毒株(APMV1/ch/China4031)。以上结果显示,此半巢式RT-PCR方法提供了一种快速检测并区分NDV强弱毒的可行途径。二、不同基因型NDV疫苗的免疫保护作用研究为了进一步了解流行毒株抗原性变异情况,研制更为有效的新型疫苗,选择具有代表性的NDV基因Ⅶ型和Ⅸ型流行株(NDV4222和NDV251 ),配以传统的LaSota株(基因Ⅱ型),以五种不同组合方式分别制备了NDV单价和多价新城疫灭活苗并进行了详细的免疫效力测定。基因Ⅶ型NDV4222株不同于其它基因型毒株,灭活后血凝价降为0,但仍具有免疫原性。首先以LaSota活疫苗株对10日龄鸡进行基础免疫,接着在第4周各组使用灭活油苗加强免疫,结果发现单独免疫和复合免疫,均可产生较强的免疫应答,免疫各组抗体变化规律极为相似。活苗免疫4日后即测得有抗体,但效价不高,在2免后第2周,抗体效价陡增,第3周略有增长。攻毒前以F48E9为诊断抗原测得各组血清中HI抗体效价均为29-210。各免疫组攻毒保护率均为100%。病理切片结果发现尽管各组抗体效价相近,但免疫组E即三种基因型病毒制作的复合疫苗免疫组,在攻毒后组织切片症状最轻。仅部分鸡在病毒进入部位——气管(滴鼻点眼攻毒方式)有部分上皮细胞坏死或脱落,此外各免疫组在各日龄均未测得有排毒,说明这种免疫程序如运用在商品化蛋鸡中,具有生物安全性意义。