目的:沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)能通过抑制宿主细胞凋亡以逃避宿主的免疫清除,但其抗凋亡机制并未完全阐明。本研究试图探讨Ct质粒蛋白pORF5与ERK1/2信号转导通路和互作宿主蛋白DJ-1三者之间的关系以及对细胞凋亡的影响,为阐明Ct致病机制提供实验依据。方法:用肿瘤坏死因子(TNF-α,20ng/ml)和放线菌酮(CHX,2μg/ml)诱导pORF5基因稳定转染的HeLa细胞(pORF5-HeLa)和空质粒稳定转染的对照HeLa细胞(GFP-HeLa)凋亡6h,利用Hoechst33342染色检测两组细胞凋亡情况,实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot分别检测凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3、Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平;用ERK1/2特异性抑制剂PD98059(30μM/ml)预处理pORF5-HeLa细胞30min后,再用凋亡诱导剂(TNF-α/CHX)刺激ERK抑制剂处理组pORF5-HeLa细胞(PD98059/pORF5-HeLa)和未加抑制剂组pORF5-HeLa细胞6h,利用Hoechst33342,TUNEL染色和流式细胞仪检测两组细胞凋亡率,采用qRT-PCR和Western blot分别检测Bax、Caspase-3、Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平;将sh-RNA-DJ-1病毒液感染pORF5-He La细胞,建立稳定干扰DJ-1表达的pORF5-HeLa细胞系及空白载体转染的对照细胞系;凋亡处理6h后,利用Hoechst33342,TUNEL染色和流式细胞仪检测稳定干扰DJ-1的pORF5细胞以及对照组细胞的凋亡率,qRT-PCR,Western blot检测Bax、Caspase-3和Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平;用凋亡诱导剂(TNF-α/CHX)刺激经PD98059预处理的pORF5-HeLa细胞和未处理组细胞6h,Western blot检测两组细胞的DJ-1蛋白表达;用凋亡诱导剂(TNF-α/CHX)刺激稳定干扰DJ-1表达的pORF5-HeLa细胞和对照细胞6h,Western blot检测两组细胞的ERK1/2磷酸化水平。结果:1、hoechst染色结果显示,对照组gfp-hela细胞出现较多固缩,碎裂,亮蓝浓染核,而porf5-hela细胞核染色呈均匀,弥散荧光,porf5-hela细胞的凋亡率较对照组下降32.4%(p<0.05);porf5-hela细胞中bax和caspase-3的mrna水平较对照组分别下降5.6倍(p<0.01)和18.6倍(p<0.01);porf5-hela细胞中bax的蛋白水平较对照组下降78.2%(p<0.01),而bcl-2较对照上升167.8%(p<0.01)。2、hoechst和tunel染色结果显示,erk抑制剂处理组porf5-hela细胞的凋亡率较未处理组升高了28.5%(p<0.05),erk抑制剂处理组tunel阳性细胞百分率为(54.6±2.1)%,未处理组阳性细胞百分率为(12.5±3.4)%,erk抑制剂处理组的tunel阳性细胞百分率较未处理组升高了42.1%(p<0.05);流式细胞仪检测结果显示,erk抑制剂处理组的porf5-hela细胞的凋亡率较未处理组增加12.57%;erk抑制剂处理组的porf5-hela中bax和caspase-3的mrna水平分别较未处理组升高2.5倍(p<0.01)和302.7倍(p<0.01);wb结果显示,erk抑制剂处理组的porf5-hela中bax蛋白水平较未处理组升高264.3%(p<0.01),bcl-2蛋白水平较未处理组降低86.6%(p<0.01)。3、hoechst和tunel染色结果显示,shdj-1-porf5-hela细胞凋亡率较对照组增加30.8%(p<0.05),shdj-1-porf5-hela细胞中tunel阳性细胞百分率为(45.2±2.3)%,未干扰组仅为(8.3±2.0)%,dj-1稳定干扰组的tunel阳性细胞百分率较对照组升高了36.9%(p<0.05);流式细胞仪检测结果显示:shdj-1-porf5-hela细胞的凋亡率较对照组上升了17.05%;shdj-1-porf5-hela细胞中bax和caspase-3的mrna水平分别是对照组的187.8倍(p<0.01)和3.6倍(p<0.01);shdj-1-porf5-hela细胞中bax的蛋白水平较对照组升高387.5%(p<0.01),bcl-2蛋白水平较对照组下降91.0%(p<0.01)。4、erk抑制剂处理组的porf5-hela细胞中的dj-1蛋白表达水平与未处理组无差别(p>0.05);shdj-1-porf5-hela细胞中的erk1/2磷酸化水平较对照组下降了102.8%(p<0.05)。结论:1、沙眼衣原体pORF5质粒蛋白具有抵抗细胞凋亡作用。2、pORF5质粒蛋白通过上调宿主蛋白DJ-1的表达激活ERK1/2信号通路抑制细胞凋亡。