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1.将鸡痘病毒疫苗毒接种鸡胚成纤维细胞，收获病变细胞，提取鸡痘病毒DNA。根据GeneBank中已发表的鸡痘病毒基因序列，设计两对引物用于扩增大小分别为1600bp和1800bp的FPV1和FPV2目的基因片段。于9～11日龄SPF鸡胚上增殖纯化鸡传染性喉气管炎病毒疫苗毒，根据GeneBank中已发表的ILTV基因序列设计一对能扩增2700bp的gB目的基因片段。设计一对引物，从质粒EGFP中扩增大小约为750bp的GFP目的基因片段。将获得的四个目的基因分别克隆到pMD19-T simple vector上，筛选阳性克隆进行序列分析。结果表明:获得的目的基因片断序列分别与标准株序列相符，可以用于下一步构建鸡传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒质粒的试验。
2.将测序完的FPV1和FPV2分别克隆到pUC19和pSK质粒中，并命名为pFP1和pFP2。将测序后的gB基因酶切后克隆到质粒pFP1中获得重组质粒pFP1-gB;将测序后的GFP基因酶切后克隆到质粒pFP2中，得到重组质粒pFP2-GFP。双酶切pFP1-gB得到FP1-gB片段，并克隆到质粒pFP2-GFP中，得到重组质粒pFP1gB-FP2GPF。酶切质粒pE/L-7.5，获得背向连接的2个鸡痘病毒启动子片段-PE/L-7.5，并将该片段克隆到重组质粒pFP1gB-FP2GFP获得重组质粒pgB-GFP，该质粒即为鸡痘病毒的转移质粒。在质粒pgB-GFP中，2个背向连接的启动子被克隆到gB和GFP基因之间，分别启动gB和GFP基因的表达。经过鉴定证明已获得鸡传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒质粒pgB-GFP。该质粒为下一步获得表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的重组鸡痘病毒奠定基础。