体外自组装IKVAV纳米纤维凝胶与神经干细胞的增殖及分化

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目的:观察体外自组装IKVAV纳米纤维凝胶对骨髓源性神经干细胞增殖、毒性及向神经元分化比列的影响。方法:实验分为干细胞组、凝胶组及联合培养组。采用SP法行Nestin免疫细胞化学染色鉴定培养的细胞。在各实验组细胞培养后的1、3、7、14天用在采用CCK-8法检测各组细胞的增殖率,MTT法检测各组细胞的毒性,流式细胞仪分析各组神经干细胞向神经元分化的比例。流式细胞仪分析细胞周期。结果:诱导分化的神经干细胞培养1d后即可见到细胞聚集,3d后可见小的神经球形成并逐渐长大,7d神经球体积约为100um,神经球饱满,边缘细胞形成桑椹样颗粒。Nestin染色呈阳性表达。CCK-8法检测结果示:共培养组细胞增殖率在各时间点明显高于干细胞组和凝胶组,差异有统计学意义(P<0.05);共培养组中细胞增殖率在第7天左右达峰值(0.58±0.02);干细胞组的细胞增殖率在第7天也到达峰值(0.4467±0.2517);凝胶组未见有细胞增殖。MTT法检测结果示:三实验组未见细胞毒性,各组间无差异(P=0.82)。流式细胞仪分析NSC向神经元分化的比例:共培养组神经干细胞分化为神经元的细胞比例在个时间点均高于其余两组(P<0.05)。共培养组在1d、3d、5d、7d、10d、14d分化为神经元的细胞比例各为:2.1%、3.0%、4.6%、7.1%、5.8%、2.7%;干细胞中分化为神经元的细胞比例为:1.9%、2.3%、3.5%、4.7%、3.1%、1.6%;凝胶组未见神经元。结论: IKVAV纳米纤维凝胶有较好的生物活性,可提高神经干细胞向神经元分化的比例。
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