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普通菜豆是人类直接消费的最重要食用豆类之一。生产上,菜豆普通细菌性疫病对普通菜豆的危害越来越重,需要不断挖掘抗性基因,培育新型抗性品种代替现有品种。本研究基于前期大规模资源筛选结果,对HR45和龙芸豆5号携带的抗性基因进行精细定位并分析候选基因,获得如下主要结果:1、HR45抗病遗传分析采用针刺法利用Xap菌对F1、F2及F2:3家系进行接种鉴定。14与21 DAI,正交杂交种F1的发病级分别是4.27与4.67,反交发病级别与正交基本一致,为4.33与4.73,说明HR45抗性为细胞核遗传;F1代发病级别位于抗感亲本之间,说明由不完全显性基因控制。F2群体抗感分离明显且呈连续分布,说明HR45抗性为数量性状。利用F2:3家系表型推测对应F2单株基因型,抗感分离不符合基因分离定律,说明HR45中至少含2个抗性基因。2、HR45抗病基因初定位利用均匀分布于普通菜豆11条染色体上的2,802个SSR标记对亲本进行多态性筛选,获得537个多态性标记,利用这些标记进一步筛选由F2单株组成的极端抗、感池,在染色体Pv06与Pv08上获得多态性标记,说明抗性基因位于Pv06与/或Pv08上。结合F2群体表型检测抗病位点,在Pv06与Pv08上检测到抗病位点。Pv06上抗病基因位于SSR标记p6s53与p8s243之间;在Pv08上共检测到2个抗病基因,位于标记p8s189与p8b24之间和p8b27与p8b28之间,相距约为8.5 kb。3、HR45抗病基因精细定位针对初定位候选区段,共开发74个SSR和125个In/Del标记,其中44个标记在亲本间有多态。利用多态性标记构建遗传图谱并结合群体表型定位抗病基因,14与21 DAI在Pv06与Pv08上都检测到抗病位点,命名为qH6与qH8。qH6位于Pv06染色体SSR标记p6s260与p8s243之间,标记间物理距离为326 kb,14与21DAI的LOD值分别为7.8和12.2、贡献率分别为6.4%与7.5%。qH8位于标记p8s433与p8b17之间,标记间物理距离为18.5 kb,14与21 DAI的LOD值分别为15.5与16.1、贡献率分别为46.6%与39.9%,该位点效应值较大,共预测到3个基因。Gene1编码AAA-type ATPase、Gene2编码PPR、Gene3编码anthocyanidin 3-O-glucosyltransferase 1-like蛋白。4、HR45抗病候选基因分析对3个候选基因在抗感材料中进行克隆、比对和结构预测。Gene1属于UBAlike家族,Gene2属于PPR超家族,Gene3属于UDPGT家族;抗感材料中Gene2、Gene3的CDS、启动子序列均存在差异。利用RT-PCR技术分析候选基因表达模式,抗感材料中Gene1表达量基本一致,抗病材料中Gene2表达量略低于感病材料,而Gene3略高于感病材料。抗感材料中3个候选基因表达均受病原菌诱导,其中Gene3表达量在接种48 h后抗病材料高于感病材料。VIGS检测结果表明Gene3可能是HR45的抗病候选基因。5、源于龙芸豆5号的抗性基因定位龙芸豆5号对Xff菌表现良好抗性。为明确其抗性基因,与感病材料杂交构建F2群体。14与21 DAI,同时在Pv10上检测到抗病位点,LOD值分别为6.41与5.35,位于SSR标记p10s174与p10s244之间,标记间物理距离为270 kb,其中10个预测基因编码的激酶、氧化酶和转录因子等可能与抗病相关。另外,上位性分析发现14与21 DAI各有4对位点之间存在上位互作效应,贡献率分别介于7.2%与12.2%、7.7%与8.8%之间,说明上位性对龙芸豆5号抗性起重要作用。