目的通过改良胰岛分离的灌注、消化、梯度离心等关键步骤,建立稳定的胰岛分离纯化方案,同时探讨适合胰岛种植的部位,建立稳定的胰岛移植模型,为胰岛移植相关研究奠定基础。实验方法采用雄性Balb/c、C57BL/6小鼠作为供体分离胰岛,比较顺行灌注和逆行灌注的效果差异,再以0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg／ml四种浓度胶原酶Ⅺ消化胰腺,通过不同的梯度离心策略分离纯化胰岛,进行双硫腙特异染色法(DTZ)染色,显微镜下观察胰岛的纯度和得率,并通过吖啶橙(AO)／碘化丙啶(PI)染色检查分离获得的胰岛活性,最终确定最佳的胰岛分离纯化方案。采用不同品系雄性小鼠(Balb/c、C57BL/6、C3H)诱导糖尿病模型,确定最佳的链脲酶素(streptozotocin, STZ)剂量,术后连续两次血糖>18mmol／L为诱导糖尿病成功,术前血糖介于18-30mmol/L作为胰岛移植受体。将上述分离纯化的胰岛种植于糖尿病鼠肾包膜下、肝内、肠系膜袢,通过监测术后血糖波动、术后糖耐量试验(IPGTT)、移植物病理学检查等方式观察胰岛移植物功能情况。统计学分析采用SPSS统计软件,采用单因素方差分析比较不同实验组之间有无统计学差异,以P<0.05为具有统计学意义。结果顺行灌注法胰腺膨胀比例为：76.4±19.5%明显优于逆行灌注法(51.1±17.7%,P<0.05),0.5mg/ml胶原酶XI 2ml/mouse灌注,置于6ml 0.5mg/ml胶原酶XI中,37℃水浴静置消化15min,为最佳消化条件。Balb/c在Ficoll-1.108(4ml)、1.096(2ml)、1.069(2ml)、HBSS(2ml),加速度1减速度1 400rpm 4min中转1800rpm8min离心后胰岛得率为125±39IEQ,纯度79.6±10.5%,经相同条件二次梯度后得率无明显变化但纯度明显提高96.2±1.4%。而C57BL／6小鼠则适应于加速度1减速度11800rpm 15min方案。经AO／PI染色鉴定分离胰岛活性良好。Balb／c、C57BL/6、C3H小鼠诱导糖尿病的最佳STZ剂量分别为：165mg／Kg,170mg／Kg和200mg／Kg,Balb／c的糖尿病诱导成功率明显高于C57BL/6和C3H,诱导7天后达到糖尿病稳态。肾包膜下胰岛移植300-450IEQ足以纠正糖尿病,术后血糖恢复正常,术后30天获取移植侧肾脏行HE染色和胰岛素免疫组化染色检查,发现胰岛存活良好,移植侧肾切后小鼠短期内血糖重新达到种植前糖尿病状态。相比之下肝内移植效果较差,500IEQ不足降低小鼠血糖,且易产生肝脏栓塞导致受体死亡；而肠系膜袢内胰岛种植后血糖恢复正常需要相对较大的胰岛移植量,约800IEQ。结论我们改进的小鼠胰岛分离纯化方法效果更佳,糖尿病模型稳定、诱导成功率高,探针引导下经PE管肾包膜下胰岛种植建立的胰岛移植模型,具有操作安全、简便,成功率高,模型稳定的特点,该模型对进行各种胰岛移植相关研究具有重要意义。